Rol de los receptores retinoicos RAR alfa y gama en la proliferación celular y en el mantenimiento y renovación de las células stem/progenitoras en una línea celular de cáncer mamario murino

CAROLINA FLUMIAN; DAMIAN E. BERARDI; MARÍA INÉS DÍAZ BESSONE; STÉFANO M. CIRIGLIANO; ELISA D. BAL DE KIER JOFFÉ; ALEJANDRO J. URTREGER; LAURA B. TODARO

Buenos Aires

Congreso; XXIX Jornadas de Oncología; 2013

Instituto de Oncología "A. H. Roffo"

Objetivos: En la actualidad, los retinoides (Rds) están siendo evaluados en ensayos clínicos para el tratamiento y la prevención del cáncer dado su rol en la regulación del crecimiento y la diferenciación celular. Los Rds ejercen sus funciones biológicas a través de receptores nucleares: los receptores de acido retinoico (RAR) y los receptores rexinoideos (RXR). El objetivo del presente trabajo fue evaluar el efecto de la activación de las isoformas alfa y gamma de los RAR en la regulación de la proliferación celular, su impacto en la modulación de la proporción de células luminales (LEP) vs. mioepiteliales (MEP) y sus implicancias en el mantenimiento y crecimiento de células con características stem/progenitoras. Materiales y Métodos: Como modelo se utilizó la línea celular LM38-LP, derivada de un tumor mamario murino, que expresa todos los RARs funcionales y que está formada por células luminales (LEP), células mioepiteliales (MEP) y células con características stem/progenitoras (MSC). Capacidad proliferativa: se evaluó por recuento directo de células LM38-LP tratadas por 144 hs con diferentes retinoides y sus combinaciones: ATRA, AM580 (agonista RAR alfa), MM (antagonista RAR gamma) AM580+MM, Ro41 (antagonista RAR alfa), BMS (agonista RAR gamma) y Ro41+BMS. Citometría de flujo: células LM38-LP fueron tratadas con los retinoides y luego marcadas con Ac anti CD24 y anti CD29 a fin de determinar el porcentaje de las poblaciones CD24+ CD29+ y CD24- CD29+. Formación de mamosferas: en placas de baja adhesión de 35 mm se sembraron 10000 células LM38-LP previamente tratadas con los distintos retinoides y sus combinaciones. Los cultivos se desarrollaron en ausencia de suero y en presencia de B27. Luego de diez días se contó el número de mamosferas y se midió su diámetro mayor. Resultados: Tanto el AM580 como el tratamiento combinando AM580 con MM disminuyeron la capacidad proliferativa de las células LM38-LP luego de 144 hs. Los tratamientos con MM, Ro41, BMS y sus combinaciones no tuvieron efecto en a proliferación. Mediante citometrfa de flujo pudimos determinar que todos los retinoides disminuyeron la relación LEP/MEP (CD24+ CD29+/ CD24-CD29+). En relación a las células con características stem/progenitoras, mediante el ensayo de formación de mamosferas, pudimos determinar que los tratamientos con AM580, MM, AM580+MM y BMS+Ro41 aumentaron el número de mamosferas. Mientras que los tratamientos con BMS, Ro41 y BMS+R041 aumentaron el tamaño de las mamosferas, sólo el AMS80 indujo el efecto opuesto. Conclusiones: Tanto RAR alfa como RAR gamma disminuyen la proporción de LEP vs. MEP pero sólo RAR alfa induce inhibición de la proliferación. Además, RAR alfa participaría en la supervivencia de las células stem/progenitoras mientras que RAR gamma estaría involucrado en el crecimiento de este componente celular.