INVESTIGADORES
URTREGER Alejandro Jorge
congresos y reuniones científicas
Título:
Efecto del tratamiento combinado de Retinoides con inhibidores farmacológicos de la proteína quinasa C (PKC) en el crecimiento, apoptosis y senescencia de la línea de adenocarcinoma mamario murino LM38-LP
Autor/es:
DAMIAN E. BERARDI; MARIA I. DIAZ BESSONE; CAROLINA FLUMIAN; STÉFANO M. CIRIGLIANO; ELISA D. BAL DE KIER JOFFÉ; ALEJANDRO J. URTREGER; LAURA B. TODARO
Lugar:
Buenos Aires
Reunión:
Congreso; XXVIII Jornadas de Oncología; 2012
Institución organizadora:
Instituto de Oncología "A. H. Roffo"
Resumen:
Los retinoides ejercen algunos de sus efectos sobre la diferenciación celular y la reversión del fenotipo maligno a través de interacciones con distintas isoformas de PKC. En el presente trabajo, nos propusimos estudiar la modulación en la expresión de las isoformas a y d de PKC cuando las células reciben un tratamiento retinoide (ATRA), así como el perfil de receptores retinoides (RARs) cuando son tratadas con inhibidores farmacológicos de PKC. Además, evaluamos el efecto de la combinación ATRA/inhibidores de PKC sobre el crecimiento in vitro y los mecanismos implicados en este efecto biológico (distribución del ciclo celular, apoptosis, senescencia). Utilizamos como modelo experimental la línea mamaria murina LM38-LP la cual posee características similares a los tumores mamarios humanos triples negativos ya que está compuesta por células luminales (LEP), mioepiteliales (MEP) y stem/progenitoras (TMSC). Mediante RT-PCR pudimos determinar que el tratamiento retinoide (ATRA 1uM) por 48 hs aumenta los niveles de PKCd y disminuye los de PKCa. Asimismo, la inhibición farmacológica de PKCa (Gö6976 2,5µM) fue capaz de inhibir la expresión del receptor RARg2, mientras que su combinación con ATRA incrementó los niveles RARb2 y disminuyó los de RARg2 (involucrados en diferenciación y proliferación respectivamente). Por otro lado, hemos observado una reducción en la tasa de duplicación celular luego de 96 hs de tratamiento tanto con ATRA, con los inhibidores de PKCa y PKCd (Rottlerina 1uM) y sus combinaciones (N de células x105: control 22±1,1; Gö6976 3,6±0,6; Rottlerina 9±0,1; ATRA 11±0,1; ATRA/Gö6976 2,3±0,03; ATRA/Rottlerina 6,7±1,3). El estudio de la distribución en el ciclo celular por citometría de flujo utilizando los mismos tratamientos reveló que tanto el ATRA como la Rottlerina inducen un arresto en la fase G1 del ciclo. El tratamiento con Gö6976 incrementó el porcentaje de células en la fase subG1 del ciclo, hecho que se correlaciona con un aumento de la apoptosis confirmado a través de un ensayo de Anexina V y cuantificación citométrica. La actividad de la enzima b-galactosidasa evaluada por microscopía de contraste de fase en células pretratadas por 48 hs, mostró un marcado aumento en el número de células senescentes en forma diferencial según el tratamiento recibido. En este sentido, el ATRA indujo senescencia principalmente en el componente MEP mientras que Gö6976 lo hace principalmente sobre la población LEP, evidenciándose además gran cantidad de células apoptóticas en este componente. En conjunto estos resultados sugieren que la inhibición del crecimiento ejercida por los retinoides es potenciada por la baja expresión y/o actividad de PKCa. Esto podría explicarse a través de la presencia de células senescentes principalmente en el componente MEP, acompañado de un arresto del ciclo celular y la inducción de apoptosis principalmente en la población LEP. Además, estos efectos biológicos correlacionan con el aumento de RARb2, involucrado en diferenciación y la disminución de RARg2 vinculado con proliferación celular.