Estudio de los mecanismos moleculares involucrados en la interacción entre el Sistema del Ácido Retinoico (RA) y la Proteína Quinasa C en la reversión del fenotipo maligno de los tumores mamarios

DAMIAN E. BERARDI; MARIA I. DIAZ BESSONE; PAOLA B. CAMPODÓNICO; CAROLINA FLUMIAN; STÉFANO M. CIRIGLIANO; ELISA BAL DE KIER JOFFÉ; ALEJANDRO J. URTREGER; LAURA B. TODARO

Buenos Aires

Congreso; XXVII Jornadas de Oncología; 2011

Instituto de Oncología "Angel H. Roffo"

Los retinoides ejercen algunos de sus efectos sobre la diferenciación celular y la reversión del fenotipo maligno a través de interacciones con isoformas de PKC. Objetivos: A) Estudiar el efecto del RA sobre el crecimiento celular de la línea mamaria murina LM3. B) Evaluar el efecto del tratamiento retinoide sobre la expresión y localizacion subcelular de PKCa   y PKCd. C) Valorar la importancia de PKCa y PKCd sobre la actividad de los receptores retinoides. D) Estudiar el rol específico de PKCa y PKCd en la progresión tumoral frente al tratamiento retinoide. Se utilizó como modelo la línea LM3, derivada del adenocarcinoma mamario murino M3. El tratamiento con la forma trans del Ácido Retinoico (ATRA) en la línea LM3 indujo un retardo en el crecimiento celular a partir de las 48 hs de tratamiento. Este efecto biológico se asoció a  una reducción de la fosforilación de Erk, un aumento en los niveles P-Akt y del inhibidor del ciclo celular p27 en la fracción nuclear, sin alterar la expresión de Ciclina D1. Por otro lado determinamos que el tratamiento con ATRA en la línea LM3 indujo un aumento en los niveles de PKCa  y PKCd conjuntamente con la traslocación nuclear de esta isoforma. Hemos evidenciado a través de un ensayo con un gen reportero que contiene el elemento de respuesta al RA (RARE-Luciferasa), que la actividad de ambas isoformas de PKC son necesarias para la activación de receptores retinoicos. Observamos que la inhibición farmacológica de PKCd impide la traslocación tanto de PKCd como la del receptor RARa al núcleo celular. Asimismo, hemos observado que PKCd co-inmunoprecipita con RARa. Ensayos in vitro revelaron un efecto aditivo en la reducción del crecimiento celular de la línea LM3, frente al tratamiento combinado de ATRA  con el inhibidor farmacológico de PKCa (Go6976). A partir de esta observación, se realizaron estudios in vivo para valorar la participación especifica de la isoforma alfa de PKC frente al tratamiento retinoide. Para ello, ratones hembras BALB/c, recibieron en forma i.v. células LM3 pre-tratadas con Go6976 a la vez que portaban pellets subcutáneos de liberacion lenta con ATRA, a fin de evaluar la importancia del tratamiento combinado en las últimas etapas de la diseminación metastásica. Observamos que este tratamiento combinado produjo un efecto sinérgico sobre la disminución en el número de metástasis pulmonares. Nuestros resultados indicarían que los retinoides inducen inhibición del crecimiento a través del arresto del ciclo celular conjuntamente con la modulación de la expresión de PKCa y PKCd. La actividad de ambas isoformas es importante para la inducción de los genes de respuesta al RA. Sin embargo solo PKCd parece tener un papel a largo plazo, evidenciado por su acoplamiento al receptor retinoide RARa y su entrada al núcleo celular. Finalmente especulamos que el tratamiento retinoide sumado a moduladores de la isoforma alfa de PKC, podría ser tenido en cuenta para pacientes que presenten cáncer de mama PKCa positivos.