ANALlSIS MOLECULAR DEL GEN PAX8 EN HIPOTIRODlSMO CONGENITO POR DISEMBRIOGENE­SIS

ESPERANTE, SEBASTIAN A; RIVOLTA, CARINA M; VARELA, VIVIANA; MIRAVALLE, LUCRECIA; HERZOVICH, VIVIANA; IORCANSKY, SONIA; TARGOVNIK, HECTOR M.

Mar del Plata, Argentina.

Congreso; XLIX Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2004

Sociedad Argentina de Investigación Clínica

El hipotiroidismo congénito tiene una incidencia de 1 en 4.000 nacidos vivos. En el 85% de los pacientes con este cuadro clíni­co heterogéneo se observa disembriogénesis sin presentar bo­cio y en el 15% restante, dishormonogénesis con bocio. En al­gunos pacientes la disembriogénesis está asociada con muta­ciones en los genes responsables del desarrollo y el crecimien­to de las células tiroideas: PAX8, TTF1, TTF2 y receptor de TSH. El gen PAX8 codifica para un factor de transcripción que partici­pa en la embriogénesis de la glándula tiroides. En el presente trabajo se realizó la búsqueda de mutaciones en 60 pacientes no relacionados con hipotiroidismo congénito y sin bocio. A par­tir de ADN genómico purificado de sangre periferica se realizó un rastreo inicial por PCR-SSCP de los exones 1 al 12 del gen PAX8 y se secuenciaron los productos con movilidad alterada. Se identificó en el exón 7 una transición 834 C> T, que corres­ponde a un cambio T225M, y una transición 859 C> T, sin varia­ción del aminoácido 233L. En el exón 9 se observó una transi­ción 1166 G>A correspondiente a un cambio G336S y en el exón 12 una transición 1477 G>A sin variación del aminoácido 439A. Se realizaron estudios poblacionales por PCR-SSCP confirmando que las mutaciones identificadas no corresponden a polimor­fismos. A partir de ARNm purificado de tiroides humana, la secuen­cia codificante de PAX8 se amplificó por RT-PCR utilizando primers específicos y fue clonada en el vector pcDNA68 en los sitios co­rrespondientes a las enzimas EcoRI y BamHI. Se secuenciaron las 1360 pb del inserto. no observando ninguna variación con res­pecto a la secuencia de referencia. En conclusión se identificaron cuatro nuevas mutaciones, dos con cambio de aminoácido: T225M y G336S y 2 dos mutaciones silenciosas: 233L y 439A. Se clonó y se secuenció el cDNA del PAX8, el que será utilizado para es­tudiar la expresión del gen y el efecto de las mutaciones sobre la función de la proteína en su unión al DNA.