ANÁLISIS DE VARIANTES GENÓMICAS EN EL GEN DEL RECEPTOR DE TSH EN PACIENTES CON HIPOTIROIDISMO CONGËNITO POR DISEMBRIOGÉNE­SIS TIROIDEA

ESPERANTE, SEBASTIÁN A.; CAPUTO, MARIELA; MIRAVALLE, LUCRECIA; IORCANSKY, SONIA; TARGOVNIK, HECTOR M.; RIVOLTA, CARINA M.

Mar del Plata, Argentina

Congreso; 50 reunión científica anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2005

Sociedad Argentina de Investigación Clínica

El hipotiroidismo congénito tiene una incidencia de 1 en 4000 nacidos vivos. En el 85% de pacientes con este cuadro clínico heterogéneo se observa disembriogénesis con ausencia de bocio y en el 15 % restante, dishormonogénesis con bocio. La disembriogénesis está asociada tanto a mutaciones en los genes responsables del desarrollo: PAX8, TTF1 Y TTF2 como en genes vinculados al crecimiento de las células tiroideas: receptor de TSH (rTSH). En el presente trabajo se realizó la búsqueda de muta­ciones en el gen del rTSH en 60 pacientes no relacionados con hipotiroidismo congénito y sin bocio. A partir de ADN genómico purificado de sangre periférica se realizó un rastreo inicial por  PCR-SSCP de los exones 1 al 9, y una porción de 900 pb del exón 10 correspondiente al dominio transmembrana del receptor. Los productos con movilidad alterada fueron secuenciados. En un paciente se identificó una nueva mutación H323Y y en otro la mutación ya descripta D36H. Ambos presentan una clínica com­patible con atireosis. Por otro lado, se analizó una secuencia repetitiva CT a -14 pb del comienzo del exón 8, que presenta alelos de 6, 8 y 9 repeticiones. La variante de 9 repeticiones se halló en 3 de 120 alelos provenientes de los pacientes y no fue identificada en 200 alelos de la población normal, por lo que se estudió la posible implicancia de este alelo en el procesamiento (splicing) correcto del exón 8. Cada una de las variantes alélicas fueron amplificadas por PCR, clonadas en el vector pSPL3 y em­pleadas para transfectar células CV -1. El ARNm obtenido fue ana­lizado mediante RT-PCR para determinar la influencia del repeti­tivo sobre el splicing. Las 3 secuencias repetitivas estudiadas en cada uno de los experimentos no mostraron ninguna diferencia en el procesamiento del exón. Próximos estudios de expresión permitirán evaluar el efecto de la mutación H323Y sobre la funcionalidad del receptor.