La persistencia de Staphylococcus aureus en un huésped con osteomielitis crónica se ve favorecida por una mutación puntual en un gen regulador de la virulencia.

SULIGOY LOZANO CM; DOTTO C; LOMBARTE SERRAT A; RIVIERE AN; ROBINSON D.A.; SORDELLI DO; BUZZOLA FR

Rosario, Pcia. Santa Fé

Congreso; XXIII Congreso Latinoamericano de Microbiología y XIV Congreso Argentino de Microbiología ALAM-CAM 2016.; 2016

Asociación Argentina de Microbiología

Staphylococcus aureus es una bacteria oportunista que puede causar infecciones severas, como la osteomielitis. Después de ingresar al huésped, S. aureus inicia un proceso de microevolución y así se adapta para la persistencia, lo que conduce a la cronicidad de la infección. El objetivo de este trabajo fue identificar cambios que ocurren en una cepa S. aureus expuesto a los mecanismos de defensa del huésped durante la infección que evoluciona hacia la cronicidad y evaluar si esos cambios afectan la virulencia del microorganismo. Para este estudio se utilizaron los aislamientos de S. aureus SaT0 proveniente de un paciente con osteomielitis crónica y SaT13 obtenida del mismo paciente 13 meses más tarde. Para evaluar las cepas de S. aureus en un modelo de osteomielitis en la rata, se inyectó 1x106 UFC en las tibias. La infección se dejó transcurrir por 14 semanas. Al cabo de ese tiempo se removieron las tibias y se determinó la severidad de la infección por morfometría. Se homogeneizó una sección de cada tibia y se sembraron los homogenatos sobre agar TSA para recuento de UFC. La funcionalidad del agr se analizó por real-time PCR, que se complementó con el análisis de presencia o ausencia de la producción de cápsula serotipo (CP8) y de alfa y beta hemolisinas en placas de agar sangre. Los genomas fueron secuenciados con tecnología Ilumina y se ensamblaron de novo con SPAdes. Los genomas obtenidos fueron anotados con Prokka y curados manualmente usando Artemis. Se compararon usando Mauve y ACT. El análisis de variantes puntuales se realizó según el protocolo descripto en Olson, 2015.Ambas cepas pertenecían al mismo complejo clonal (CC1) y compartían el mismo secuenciotipo (ST188), pulsotipo, tipo de spa (t189) y tipo de Agr (tipo I). El análisis de las secuencias de genoma completo de SaT0 y SaT13 no presentó diferencias estructurales, ni pérdida o ganancia de elementos móviles. Sin embargo, se encontró una deleción de una base en agrC que genera un cambio del marco de lectura y un codón stop prematuro en la cepa SaT13. Por qRT-PCR se demostró la drástica reducción de la expresión de la molécula efectora RNAIII del regulador global agr en la cepa SaT13. En concordancia con este resultado, la cepa SaT0 expresaba CP8, y alfa- y beta- hemolisinas, mientras que la cepa SaT13 no lo hacía. Las secuencias de los 16 genes del locus cap y los genes hla y hlb estaban conservadas en ambas cepas. En conclusión, si bien la falta de expresión de factores de virulencia que dependen de la expresión de RNAIII vuelve a S. aureus menos virulento, una mutación en el gen agrC altera la expresión del sistema agr y por ende del RNAIII permitiendo una mejor adaptación de S. aureus al huésped para la persistencia y la cronicidad.