El complejo Gbeta-gama participa en la señalización de CRH en células neuronales hipocampales.

DOS SANTOS CLARO, P.; INDA, C.; SENIN, S.; SILBERSTEIN, S.

Mar del Plata

Congreso; LX Reunión Anual Conjunta de la Sociedad Argentina de Investigacion Clinica (SAIC) y la Sociedad Argentina de Fisiología (SAFIS); 2015

CRH ejerce un rol central en la respuesta neuroendócrina y comportamental al estrés, dirigiendo la activación del eje HPA y actuando como neuromodulador en el sistema nervioso central. Su desregulación se relaciona con desórdenes como ansiedad/depresión y enfermedad de Cushing. Nuestro objetivo es definir las vías de señalización de CRH por el receptor CRHR1 y los componentes involucrados, con potencial relevancia terapéutica en desórdenes ligados a estrés. CRHR1 es un GPCR cuya señalización involucra las vías del AMPc, las MAPKs y el calcio. La proteína G heterotrimérica acoplada a GPCRs está formada por las subunidades alfa, beta y gama. Nos propusimos determinar si el complejo Gbeta-gama está involucrado en la señalización de CRHR1 mediada por CRH. Utilizamos como modelo la línea celular neuronal hipocampal HT22, que expresa establemente el CRHR1 (HT22-CRHR1). Empleando un scavenger de Gbeta-gama (sobreexpresión de la subunidad Galfa de transducina) y un inhibidor farmacológico (galeína) analizamos la participación del complejo en las vías de señalización. Mediante sensores de FRET observamos que el bloqueo genético y farmacológico de Gbeta-gama disminuyó significativamente la respuesta global de AMPc mediada por CRH. El análisis por WB de las formas fosforiladas mostró que la activación de CREB, efector clásico de la vía de AMPc, y la de ERK1/2 se encontraron disminuidas en células en las que se bloqueó el complejo. Por RT-PCR exploramos la expresión de las adenilil ciclasas en células HT22-CRHR1. Detectamos tanto formas estimulables como inhibibles por Gbeta-gama, lo que sugiere que la respuesta de AMPc proviene de un balance entre la contribución relativa de cada una de estas enzimas. Estos resultados indican que el complejo Gbeta-gama participa en la señalización de CRH a través de CRHR1 en el contexto neuronal hipocampal y contribuyen a definir los mecanismos implicados a nivel central. Apoyado por ANPCyT, CONICET, UBA y FOCEM (COF 03/11).