Interacción de BMP-4 y ácido retinoico en la inhibición de la función de la célula corticotrófica

NIETO LE; FUERTES M; ANTICO ARCIUCH VG; ARZT E

Mar del Plata

Congreso; LX Reunión de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC); 2015

Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC)

La Proteína morfogenética ósea 4 (BMP-4) es un factor de desarrollo,metabolismo y diferenciación celular que se encuentra presente en lahipófisis normal y estimula a la célula lactotrófica hipofisaria.Previamente demostramos que el tratamiento in vitro con BMP-4 decélulas corticotrofas tumorales AtT-20, disminuye la secreción decorticotrofina (ACTH) y la proliferación celular. Demostramos ademásque el Ácido Retinoico (AR), un metabolito de la Vitamina A que inducediferenciación y apoptosis en distintos tipos celulares, inhibe laproliferación, invasión y el crecimiento tumoral corticotrofo in vivo. Estetrabajo busca elucidar la posible interacción entre las vías deseñalización de BMP-4 y AR en la regulación del corticotrofo, y losmecanismos moleculares participantes. En la línea celular tumoralcorticotrofa de ratón AtT-20, se determinó la expresión de receptoresde AR mediante Western Blot, observando la presencia de receptoresde tipo RARβ, RXRα, y RXRγ, utilizando la línea celular HeLa comocontrol positivo de expresión de estos receptores. En células AtT-20transfectadas con un vector conteniendo la secuencia promotora deProopiomelanocortina (POMC) asociada a un gen reportero deLuciferasa, y luego estimulando con BMP-4, observamos la inhibiciónde POMC (59 % 100 ng/mL; p < 0.01) en forma dosis dependiente (50-200 ng/mL), determinando que la acción de BMP-4 sobre ACTH seproduce a nivel transcripcional. Esta inhibición de BMP-4 se observaestimulando el promotor con CRH (100 nM) o Forskolina (10 μM). Lacotransfección con los inhibidores de la vía de señalización de Smads,Smad 6 y Smad 7, revierte esta acción. Demostramos que el AR (100nM) también inhibe (42 %; p < 0.05) transcripcionalmente a POMC. Elcotratamiento de AR y BMP-4 presenta un efecto sinérgico. Tras elanálisis in silico de la secuencia promotora de POMC, observamos que el mismo contiene un elemento de respuesta a AR (RARE), por locual analizamos el efecto de BMP-4 y AR sobre la actividadtranscripcional del reportero RARE-Luc. Encontramos que BMP-4amplifica el efecto estimulatorio de AR sobre RARE. Los resultadosdemuestran que ambos factores inhibitorios, BMP-4 y AR, actúan anivel transcripcional sobre POMC, haciéndolo en forma sinérgica. Lasecuencia RARE del promotor de POMC estaría involucrada en estaregulación. El potencial uso terapéutico de estas sustancias sobre lostumores corticotropos se verá favorecida con la comprensión de lostumores corticotropos se verá favorecida con la comprensión de losmecanismos involucrados. Apoyado por ANPCyT, CONICET, UBA y FOCEM (COF 03/11)