DIFERENTES FUENTES DE AMP CÍCLICO INVOLUCRADAS EN LA SEÑALIZACIÓN DEL GPCR CRHR1

INDA MARÍA CAROLINA; BONFIGLIO JUAN JOSÉ; SENIN SERGIO; DOS SANTOS CLARO PAULA AYELÉN; SILBERSTEIN SUSANA

Mar del Plata

Congreso; LIX REUNION CIENTiFICA ANUAL Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2014

Sociedad Argentina de Investigación Clínica

La hormona CRH ejerce un rol central en la respuesta coordinada al estrés, dirigiendo la activación del eje hipotálamo‐hipófisis‐adrenal y actuando como neuromodulador en el sistema nervioso central. Nuestro objetivo es estudiar las vías de señalización celular de CRH mediada por el receptor CRHR1, con potencial relevancia terapéutica en desórdenes ligados a estrés. CRHR1 es un GPCR cuya señalización canónica involucra la activación de la proteína Gs y las adenilil ciclasas transmembrana (tmACs). Se ha descripto recientemente que existe una adenilil ciclasa soluble (sAC), que tiene una localización y una regulación diferente. Utilizamos a la línea celular HT22 como modelo hipocampal en la cual se generaron clones estables del CRHR1. Empleando inhibidores farmacológicos específicos (tmACs ?ddA‐, sAC ‐2HE y KH7‐) y el silenciamiento de sAC analizamos la contribución de las distintas fuentes de cAMP en la señalización de CRH. Por métodos bioquímicos y con sensores de FRET, demostramos que CRH genera un aumento de AMPc que depende tanto de las tmACs como de sAC. Como efectores clásicos de la vía de cAMP,demostramos también que la actividad de PKA (sensor de FRET) y la fosforilación de CREB (WB) dependen de ambas fuentes de cAMP. La fosforilación de las MAPK ERK1/2 es fundamental para la acción de CRH. Por WB, demostramos que sAC contribuye a la activación ERK1/2 con un perfil diferencial al de las tmACs. Más aún, en la línea de corticotrofos AtT20, que tiene CRHR1 endógeno, sAC también contribuye a la activación de ERK1/2 en respuesta a CRH. Sin embargo, otros agonistas de GPCRs ligados a Gs, como isoproterenol y PACAP38, no señalizan a través de sAC, indicando que es un componente específico de la vía de CRHR1. La identificación de sAC como una segunda fuente de AMPc en respuesta a un GPCR es relevante en el contexto del paradigma de señalización desde microdominios y la regulación diferencial de las ACs. Apoyado por ANPCyT, CONICET, UBA y FOCEM (COF 03/11).