CRH señaliza a través de diferentes fuentes de AMPc en células neuronales hipocampales

INDA, C.; BONFIGLIO J.J.; SENIN, S.; ATORRESI, A.; GONZÁLEZ, H.; HOLSBOER F.; ARZT, E.; SILBERSTEIN, S.

Mar del Plata

Congreso; LVIII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2013

La hormona liberadora de corticotrofina (CRH) y su receptor de tipo 1 (CRHR1) coordinan la respuesta a estrés y están relacionados con los desórdenes afectivos. En circuitos extrahipotalámicos, CRH funciona como un neuromodulador afectando la arquitectura neuronal y la transmisión sináptica. Nuestros trabajos previos indican una acción específica de CRH en estructuras límbicas. Con el objetivo de caracterizar la señalización de CRHR1 a nivel central utilizamos a la línea celular HT22 como modelo neuronal hipocampal. En clones estables para CRHR1 (HT22-CRHR1), demostramos que CRH induce el crecimiento de neuritas mediante la activación de CRHR1 y la vía de cAMP/PKA. En general, CRHR1 señaliza a través de Gαs, la activación de las adenilil ciclasas transmembrana (tmACs) y el aumento de AMPc. A través del efecto neuritogénico, identificamos por primera vez que la isoforma soluble de AC (sAC) es una segunda fuente de cAMP. Más aún, usando inhibidores específicos de tmAC (ddA) y sAC (KH7), y activadores de sAC (Ca++ y HCO3-) observamos que el AMPc generado por la sAC tiene un rol clave en los cambios morfológicos inducidos por CRH. Dada la importancia del AMPc en la fisiología neuronal y la distribución y regulación diferencial de las ACs, iniciamos el estudio de los distintos pools de cAMP en la señalización de CRH. Utilizando inhibidores farmacológicos (ddA, KH7 y 2HE) y siRNAs específicos, identificamos que tanto las tmAC como sAC están involucradas en la activación de CREB y ERK1/2 en respuesta a CRH 10nM en HT22-CRHR1. Por métodos bioquímicos se demostró la contribución de ambas fuentes a la acción de CRH. Para estudiar la coordinación espacio-temporal de la señalización, empleamos sensores de FRET para monitorear en células vivas la dinámica del AMPc (ICUE3) y la actividad de PKA (AKAR4) dependiente de CRH. Este estudio contribuye a describir los mecanismos implicados en la acción de CRH a nivel central.