Determinación del perfil de expresión de genes relacionados con la metilación de ADN durante el cultivo in vitro de Allium sativum L

GARCÍA LAMPASONA, SANDRA CLAUDIA ; BURBA, JOSÉ LUIS; GIMENEZ, MAGALÍ DIANA; CONCI, VILMA CECILIA; SÁNCHEZ PUERTA, MARÍA VIRGINIA; SEGURA, DIANA MARÍA

Jornada; XXIV Jornadas de Investigación y VI de Posgrado; 2016

La metilación de citosinas del ADN cumple una función clave en la regulación de la expresión génica en las plantas. Las responsables de este cambio químico son tres metiltransferasas MET1, DRM2 y CMT3. En nuestro grupo de trabajo determinamos que el cultivo in vitro produce variación somaclonal en ajo. Al analizar la metilación del ADN mediante la técnica de MSAP observamos cambios en los patrones de metilación en plantas cultivadas in vitro con respecto al control, que consistieron en la disminución de los sitios internamente metilados por hipermetilación. En base a estos resultados surgió la hipótesis de que estos cambios podrían estar relacionados con la actividad diferencial de las enzimas MET1, DRM2 y CMT3 planteándonos como objetivo evaluar la expresión génica de los genes que codifican estas metiltransferasas. Para conocer la secuencia de los genes homólogos a MET1, DRM2 y CMT3 en A. sativum se realizó la búsqueda de secuencias de genes homólogos en bases de datos de ESTs de Monocotiledóneas en PubMed (www.ncbi.nlm.nih.gov). Se extrajo ARN a partir de hojas de ajo y se sintetizó cDNA empleando cebadores poliT. Los cebadores diseñados en función de las secuencias de los dominios conservados de los genes MET1, CMT3 y DRM2, permitieron amplificar fragmentos a partir de cDNA de 150, 200 y 200 pares de bases respectivamente que hipotéticamente corresponden a genes de A. sativum homólogos a éstos.