Monitoreo de melatonina en Arabidopsis thaliana mediante UPLC-MS/MS

ISMAEL GATICA HERNÁNDEZ; FEDERICO JOSÉ VICENTE GOMEZ; SOLEDAD CERUTTI; MARÍA FERNANDA SILVA

La Plata

Congreso; VIII Congreso Argentino de Química Analítica; 2015

Melatonina (MT), conocida como la ?hormona del sueño?, es una indolamina aislada en 1958 dela glándula pineal bovina [1]. Desde su descubrimiento, se desarrollaron diversos métodos para sudeterminación y evaluación de su variación circadiana en fluidos y tejidos biológicos. Sin embargo,la mayoría de estos métodos fueron desarrollados para su aplicación en tejidos animales. Esto llevóa que su estudio en plantas avance lentamente debido a la aplicación directa de estos métodosdesarrollados para el análisis en vertebrados. Además, la susceptibilidad de esta molécula a ladegradación y su naturaleza anfipática, han contribuido a la variabilidad de los resultadosinformados en la literatura científica [2].El presente trabajo se basó en el desarrollo de un procedimiento de extracción y cuantificaciónde MT en hojas de Arabidopsis thaliana. Posteriormente, se determinaron los niveles de estahormona en diferentes estados del desarrollo de la planta, así como a lo largo del día y en diferentescondiciones de cultivo. Las muestras de hojas fueron liofilizadas y homogeneizadas con nitrógenolíquido previo a la extracción. Se optimizaron las variables para la extracción mediante la aplicaciónde una estrategia quimiométrica multivariada de diseño factorial completo. Se empleó un sistemaUHPLC-(+)ESI-MS/MS para la separación, ionización, fragmentación y detección de MT. Seseleccionaron dos transiciones provenientes de la fragmentación del ión pseudomolecular de MT([M+H]+ (m/z) = 233) para su identificación y cuantificación: 233 > 216 y 233 > 174.Los límites de detección (LOD) y de cuantificación (LOQ) fueron de 10 ng/L y 100 ng/L,respectivamente. Esta metodología permitió la cuantificación de MT en hojas de Arabidopsisthaliana en concentraciones en el orden de los nanogramos por gramo de materia seca. Se determinóque los valores de melatonina no fluctúan a lo largo del día y son mayores en plantas cultivadas bajoradiación natural.Referencias[1] Lerner, A.B; Case, J.D.; Takahashi, Y; Lee, T.H; Mori W. (1958) Journal of the AmericanChemical Society 80 (10), 2587?2587.[2] Van Tassel, D.L; Roberts, N; Lewy, A; O'Neill S.D. (2001). Journal of pineal research31(1), 8-15.