Determinación de ácidos fenólicos en extractos de orujo mediante GC-qMS

FONTANA, A.; ANTONIOLLI, A.; SILVA, M.F.; BOTTINI, R.

Los Cocos

Congreso; 1 Congreso de Espectrometría de Masa; 2012

Sociedad Argentina de Espectrometría de Masa

Los residuos de vinificación se caracterizan por la presencia de una elevada concentración de compuestos bioactivos debido a una extracción incompleta durante el proceso de vinificación. Dado el carácter antioxidante de estos metabolitos, el uso de los residuos de la industria vitivinícola no sólo redundaría en un beneficio en términos de desactivación de los mismos, sino que además permitiría la obtención de productos de alto valor agregado por su posible aplicación biotecnológica. Los ácidos fenólicos representan un grupo importante de estos compuestos bioactivos y dado el creciente interés en la utilización de estos residuos, particularmente por su elevada capacidad antioxidante, se remarca la necesidad de contar con métodos analíticos sensibles, selectivos y confiables para la determinación y caracterización cuali- y cuantitativa del perfil de dichos compuestos. Dado el carácter no-volátil de los ácidos fenólicos se requiere la aplicación de una técnica de derivatización previo al análisis por GC-MS a los fines de incrementar la volatilidad, y mejorar la sensibilidad y calidad de la separación cromatográfica. De esta manera, el objetivo de este trabajo fue el desarrollo de una metodología eficiente para la derivatización de ácidos fenólicos y la determinación del perfil de los mismos en extractos de orujo mediante GC-EI-qMS. La derivatización propuesta se realizó mediante sililación utilizando el reactivo N-metil-N-trimetilsilil-trifluoroacetamida (MSTFA). Durante esta etapa, los grupos con hidrógenos activos de los ácidos fenólicos (-OH y -COOH) son reemplazados por un grupo trimetilsilil. Se trata de una reacción de sustitución nucleofílica, en la que se produce un ataque nucleofílico sobre el átomo de silicio del trimetilsilil. Esta fase ayuda a obtener derivados TMS más volátiles y termotolerantes, así como también menos polares, lo cual permite un análisis satisfactorio por GC-MS. La reacción fue asistida mediante la aplicación de microondas (MW) en lugar del calentamiento convencional en bloque térmico, lo que permitió incrementar la velocidad de reacción y reducir los tiempos de análisis de la técnica, alcanzando eficiencias de derivatización similares a la técnica convencional. La fragmentación más frecuentemente observada fue la pérdida de un grupo CH3 del Si(CH3)3 dando el fragmento [M - 15] característico. Este patrón fue observado en el análisis GC-qMS de los ácidos p-coumárico, siríngico y cinámico. En el caso de los ácidos gálico y cafeico se observaron patrones de fragmentación mixtos que incluyeron la pérdida de grupos Si(CH3)3 completos. Para todos los analitos se obtuvo un patrón característico e idéntico al de patrones puros, permitiendo la identificación satisfactoria e inequívoca de cada compuesto. De esta manera, la metodología desarrollada fue aplicada de forma satisfactoria para la cuantificación de ácidos fenólicos en muestras de extractos de orujo mediante GC-qMS. La derivatización propuesta utilizando MSTFA y MW resultó en una alternativa novedosa y conveniente para la determinación de analitos polares, mostrando selectividad y sensibilidad adecuadas para la determinación de ácidos fenólicos en extractos de orujo.