IBAM   22618
INSTITUTO DE BIOLOGIA AGRICOLA DE MENDOZA
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
DESARROLLO DE UNA METODOLOGÍA UHPLC-(+)ESI/MS/MS RÁPIDA Y SENSIBLE PARA EL MONITOREO DEL CONTENIDO DE MELATONINA EN HOLLEJOS Y VINOS
Autor/es:
GOMEZ, FEDERICO J. V.; FERNANDEZ, MARÍA A.; MARTINEZ, LUIS D.; RABA, JULIO; SILVA, MARIA F; CERUTTI, ESTELA S.
Lugar:
Santa Fe
Reunión:
Congreso; 6° Congreso Argentino de Química Analítica; 2011
Institución organizadora:
Universidad Nacional del Litoral
Resumen:
Melatonina (MEL, P.M. 232 g/mol) es una hormona de la glándula pineal involucrada en la regulación de procesos fisiológicos, incluyendo ritmo circadiano y fotoperiodicidad. Es un potente antioxidante, promueve propiedades inmunomodulatorias y citoprotectivas, mostrando efectos beneficiosos para el sistema inmunológico[1]. Su presencia en plantas superiores fue descubierta recientemente y el conocimiento de su función in vivo es muy limitado. En consecuencia, el empleo de metodologías analíticas que permitan separarla y detectarla en plantas de manera sencilla, rápida y confiable es de gran importancia. En este sentido, se procedió al desarrollo de un método de análisis de melatonina en hollejos y vinos mediante separación cromatográfica de ultra-alta resolución (UHPLC) acoplada a la determinación mediante ionización por electrospray en modo positivo ((+)ESI) y asociada a detección masa en tándem (MS/MS). Se evaluaron aspectos relacionados a la preparación y limpieza de las muestras a través de filtrado-introducción directa y extracción en fase sólida (SPE), metodologías cromatográficas de separación UHPLC basadas en diversas fases estacionarias y móviles, condiciones de ionización y variables operativas de fragmentación/detección del espectrómetro de masas tipo triple cuadrupolo en modo de monitoreo de reacción múltiple (MRM). En este contexto, se utilizaron muestras provenientes de uvas del varietal Malbec, año 2010. Luego de su optimización con diferentes solventes, cartuchos de fase C8 se eligieron para la extracción de melatonina de las muestras mencionadas. Debido a sus características químicas, se seleccionó una columna de cromatografía líquida de interacción hidrofílica (HILIC) como fase estacionaria y agua (A)/acetonitrilo (B) como fases móviles (0.45 Ml/min) para la elución en modo gradiente de MEL (t = 0.0 min, B: 95%; t= 3.0-4.0 min, B: 40%, t= 4.2 – 6.0 min, B: 95%). En cuanto a la detección masas, se usaron dos transiciones provenientes de la fragmentación del ión pseudomolecular de MEL ([M+H]+ (m/z) = 233) para su identificación y cuantificación: 233 > 216 y 233 > 174, las cuales corresponden a pérdidas de NH3 y del grupo CH3CONH2 de la porción alifática de la molécula. Los límites de detección (LoD) y de cuantificación (LoQ) fueron de 10 ng/L y 100 ng/L, respectivamente. Se realizaron estudios de recuperación, repetitividad, reproducibilidad y eficiencia de ionización. La metodología propuesta se aplicó a la detección de melatonina en vinos y hollejos, las concentraciones detectadas fueron en el orden de los ng/L-µg/L, respectivamente. Bibliografía: [1] Hardeland R. Cell Mol Life Sciences 65 (2008) 2001–2018.