INVESTIGADORES
RODRIGUEZ TALOU Julian
congresos y reuniones científicas
Título:
Plataforma biotecnológica integrada para la producción y purificación de antígenos del virus del dengue en células de insecto
Autor/es:
SMITH E; URTASUM N; CEREZO J; MIRANDA MV; RODRÍGUEZ TALOU J
Lugar:
Santa Fe
Reunión:
Simposio; SAProBio 2014, 3er Simposio Argentino de Procesos Biotecnológicos; 2014
Resumen:
El Dengue es una de las enfermedades virales más importantes a nivel mundial en términos de morbilidad y mortalidad. La Organización Mundial de la Salud calcula que cada año se producen entre 50 y 100 millones de infecciones en el mundo y esta enfermedad es ahora endémica en más de 100 países tropicales y subtropicales. Pese a esto no existe aún una vacuna en el mercado ni fármacos antivirales específicos contra el Dengue. La glicoproteína de la Envoltura (E) forma parte de la envoltura viral y constituye la principal proteína estructural de los Flavivirus. Esta proteína media la unión del virus a las células y su entrada, siendo por esto el principal target para vacunas y antigripales. El Dominio III (DomIII) de la proteína E del virus del Dengue es el domino implicado en la unión a los receptores celulares. Este dominio contiene epitopes que generan anticuerpos neutralizantes serotipo específicos y es más fácil de producir en sistemas recombinantes por su menor tamaño. Recientemente, las hidrofobinas (HFB), proteínas anfifílicas de entre 7.5?10 kDa producidas por hongos filamentosos, han sido descriptas como eficientes proteínas de fusión para la purificación de proteínas recombinantes en bioprocesos. Debido a sus características, las proteínas fusionadas a ellas ven alteradas su hidrofobicidad y pueden ser separadas fácilmente en sistemas de dos fases acuosas (ATPS) basados en surfactantes no iónicos. La fusión proteica particiona en la fase del surfactante mientras que la mayoría de las proteínas lo hacen en la fase acuosa. De esta forma, en un sencillo paso de purificación se obtiene un buen rendimiento de la proteína recombinante fusionada a HFB con un alto grado de pureza. En general, los ATPS son rápidos, sencillos, de bajo costo y fáciles de escalar. Por otro lado, las hidrofobinas permiten la inmovilización de los antígenos fusionados a ellas en soportes sólidos comúnmente empleados en el diseño de kits de diagnóstico, de manera eficiente y correctamente orientados. El objetivo de este trabajo es el desarrollo de una plataforma integrada de producción y purificación de antígenos del virus del Dengue utilizando el sistema baculovirus/células de insecto. Para ello, se propone expresar la proteína E y su DomIII como proteínas de fusión a HFB para una fácil y económica purificación por sistemas de dos fases acuosas. Ambas proteínas poseen una potencial aplicación biotecnológica orientada hacia la obtención de una vacuna de subunidades y también en el desarrollo de kits de diagnóstico.