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En la Cátedra de Biotecnología e Instituto UBA-CONICET NANOBIOTEC, Fac Farmacia y Bioquímica, UBA, hemos trabajado en la producción de antígenos del dengue (DENV) en diferentes sistemas de producción vegetales. Estos estudios se centraron en dos sistemas vegetales de expresión principales: el cultivo de células en suspensión y las plantas crecidas en cámara de cultivo. En este sentido, establecimos cultivos de suspensiones celulares de N. tabacum y M. citrifolia que expresan la proteína E del DENV-2. La elección de estas especies vegetales se basó en la gran capacidad de secreción de proteínas recombinantes y de la capacidad de crecimiento como pequeños agregados celulares, lo que facilita la secreción al medio de cultivo de la proteína heteróloga con la consecuente facilitación de su recuperación del mismo. Encontramos que los niveles de producción de la proteína recombinante al utilizar las suspensiones celulares de N. tabacum (línea BY-2) fueron los más altos, alcanzando valores de hasta el 0.3% de la proteína recombinante en función de las proteínas totales solubles (PTS). Asimismo, la presencia de etiquetas de direccionamiento (GRP, glycin rich protein signal peptide) y retención en RE (KDEL) permitieron mayores productividades de la proteína DENV-E (Martínez et al., 2011). Además, decidimos explorar el sistema de expresión transiente de proteínas recombinantes basado en la utilización de vectores virales desarmados en plantas de N. benthamiana, denominada Magnifection (Bayer®). Utilizando este sistema, hemos logrado producir las proteínas antigénicas E y CprME del VD-2 así como también la producción de la fusión de la proteína core del virus de la hepatitis B con el dominio III de la proteína E del VD-2 (HBcore-DV2d3) (Martínez et al., 2010). En comparación con las suspensiones celulares, la utilización de esta metodología nos permitió disminuir los tiempos de clonado y expresión, y aumentar drásticamente los rendimientos obtenidos de las proteínas recombinantes, acortando los tiempos del proceso de producción general de 18 a 3 meses. Los niveles de proteína recombinante obtenidos fueron altos, y acordes a los niveles alcanzados por otras proteínas recombinantes que utilizaron este sistema (Santi et al., 2008; Huang et al., 2006). Se obtuvieron a los 7 días post-infección rendimientos de 0.6 mg/gPF (mg de proteína recombinante por gramo de peso fresco), lo que corresponde al 3% de las PTS. Además, la fusión HBcore-VD2d3 fue producida por la célula vegetal de forma particulada (Martínez et al. 2010) y los niveles de producción de VD-E fueron aumentados significativamente cuando la misma fue co-expresada con la proteína p19 en las plantas (Martinez, 2010, Tesis Doctoral). En todos los casos, las proteínas producidas por la célula vegetal fueron reconocidas por un panel de anticuerpos monoclonales y policlonales que confirmaron la identidad de las mismas y la conservación de la integridad de sus epitopes. A su vez, no se detectaron productos de degradación en ninguno de los casos.Recientemente, incorporamos la tecnología de fusión de proteínas recombinantes con hidrofobinas (HFB). Debido a las características de las HFB, las proteínas fusionadas a ellas ven alteradas su hidrofobicidad y pueden ser separadas fácilmente en sistemas de dos fases acuosas (ATPS), principalmente en aquellos basados en surfactantes no-iónicos. Asimismo, se ha observado que las proteínas fusionadas a HFB en plantas se acumulan en altas concentraciones formado ?protein bodies?. Esta tecnología permite integrar la producción de las proteínas de fusión con una sencilla y económica purificación por ATPS y su posterior inmovilización en por adsorción en diferentes soportes sólidos de carácter hidrofóbico que pueden ser empleados en el desarrollo de reactivos de diagnóstico.

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