Integración de bioprocesos en el aula de Biotecnología: modelo de producción de proteínas recombinantes en plantas.

PERASSOLO M; CEREZO J; BUSTO VD; MINOIA J; SMITH ME; GIULIETTI AM; RODRIGUEZ TALOU J.; CARDILLO AB

Córdoba

Jornada; 1º JORNADAS NACIONALES DE ENSEÑANZA DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA; 2018

ECUAFYB

El objetivo principal fue el diseño de un trabajo práctico donde los alumnos se interioricen con la producción de proteínas recombinantes en sistemas vegetales y la incorporación del concepto de procesos integrados para el desarrollo de un bioproceso. Como modelo utilizamos la expresión de la proteína GFP (Green Fluorescent Protein) fusionada a hidrofobina. Metodología: proponemos el empleo de dos sistemas de producción de proteínas recombinantes: expresión transiente por agroinfiltración mediada por Agrobacterium en hojas de plantas de Nicotiana benthamiana y producción estable por cultivo de suspensiones celulares. Se verificará la expresión de la proteína recombinante GFP-HFB mediante la observación bajo luz ultravioleta (UV), de las plantas de N. benthamiana transformadas por agroinfiltración. Se extraerá las proteínas totales y se realizará la purificación de GFP-HFB por sistemas de dos fases acuosas (ATPS) con detergentes no-iónicos. Y se evaluará tanto la expresión como la purificación de la proteína recombinante mediante geles de SDS-PAGE.Resultados: se logró visualizar la evolución de la expresión transiente de la proteína de fusión en plantas; la fusión de GFP a hidrofobina permitió lograr una purificación sencilla por ATPS.Conclusiones.El diseño de este TP nos permitiría:Que los alumnos logren conceptualizar en forma práctica la tecnología de expresión transiente y la producción estable proteínas recombinantes en sistemas vegetales.Lograr que los alumnos adquieran el conocimiento práctico del empleo de proteínas de fusión como estrategia para la purificación de proteínas de recombinantes y el manejo de la tecnología de ATPS para la purificación proteínas como una técnica sencilla y potente. Finalmente, que logren visualizar en la práctica la importancia de la integración de procesos en Biotecnología.