DISEÑO DE UN ENZIMOINMUNOENSAYO QUE PERMITA LA SEROTIPIFICACIÓN DEL VRUS DEL DENGUE EN SUEROS DE PACIENTES INFECTADOS BASADO EN UNA ESTRATEGIA INTEGRADA PARA LA EXPRESIÓN Y PURIFICACIÓN DEL DOM III DE LA PROTEÍNA E DEL DENV FUSIONADOS A HIDROFOBINAS.

CEREZO J; TARGOVNIK AM; SMITH ME; CORRALES AGUILAR E; MIRANDA MV; RODRIGUEZ TAOU J

Jornada; DISEÑO DE UN ENZIMOINMUNOENSAYO QUE PERMITA LA SEROTIPIFICACIÓN DEL VRUS DEL DENGUE EN SUEROS DE PACIENTES INFECTADOS BASADO EN UNA ESTRATEGIA INTEGRADA PARA LA EXPRESIÓN Y PURIFICACIÓN DEL DOM III DE LA PROTEÍNA E DEL DENV FUSIONADOS A HIDROFOBINAS.; 2022

Introducción. El virus del dengue (DENV) presenta cuatro serotipos (1-4) antigénicamente diferentes. El dominio III (DomIII) de la proteína E, contiene múltiples epitopes neutralizantes que son serotipo-específicos, y carece de otros que desencadenan anticuerpos no neutralizantes de reactividad cruzada. Recientemente ha sido descripta una secuencia consenso para el DomIII, del DENV, la cual demostró capacidad de generar una respuesta inmune contra los 4 serotipos. En trabajos previos se produjo las distintas variantes del DomIII fusionados a hidrofobinas que permite una purificación en sistemas de dos fases acuosas y una inmovilización directa por adsorción del producto en placas multiwell usadas en técnicas de ELISA. Objetivos. El objetivo del presente trabajo es presentar una estrategia integrada producción, purificación e inmovilización de un antígeno del DENV para el diseño de un enzimoinmunoensayo que permita detectar anticuerpos contra Dengue y además poder diferencias los diferentes serotipos. Metodología. Los antígenos se produjeron en larvas de insectos y P. pastoris. Los sueros empleados fueron serotipificados por una técnica de micro neutralización por reducción de placas. Resultados. Con el fin de evaluar los ELISA in house desarrollados, se construyeron curvas ROC según cada serotipo y sistema de expresión de los antígenos de sensibilización, a partir de las absorbancias para los sueros obtenidas en los ELISA clasificados como verdaderos positivos y verdaderos negativos según el ensayo de neutralización, considerado gold standard. Conclusiones. Los ELISA in house, demostraron una exactitud general aceptable, a excepción del que utiliza el antígeno DomIII4HFBI expresado en larvas de insecto, el cual no demostró capacidad de discriminación. El ELISA in house puesto a punto en donde se utiliza el antígeno DomIII-consenso-HFBI expresado en P. pastoris presentó la mayor exactitud global, demostrando la mejor performance entre los ensayos evaluados.