INVESTIGADORES
RAPISARDA Viviana Andrea
congresos y reuniones científicas
Título:
Regulación y función de enzimas bacterianas del metabolismo redox en relación a niveles de cobre y condiciones de cultivo
Autor/es:
RAPISARDA, V. A.; RINTOUL, M. R.; SCHURIG-BRICCIO, L. A.; VILLEGAS, J. M.; GRILLO-PUERTAS, M.; LENCINA, A. M.
Reunión:
Jornada; Primeras Jornadas de Ciencia y Técnica de la Universidad Nacional de Tucumán; 2011
Institución organizadora:
UNT
Resumen:
NADH deshidrogenasa-2 (NDH-2), de la cadena respiratoria de Escherichia coli, es una flavoproteína de membrana plasmática que actúa como una Cu(II)-reductasa. Está codificada por el gen ndh con un promotor altamente regulado por factores transcripcionales globales. El propósito de nuestro proyecto es el estudio de la estructura, función y regulación de NDH-2, su relación con otras enzimas del metabolismo aeróbico y su rol en distintas condiciones ambientales y fases de crecimiento. En nuestro laboratorio usamos técnicas generales de biología molecular, microbiología, enzimología y biofísica, haciendo especial énfasis en la regulación de expresión de genes, caracterización de enzimas redox, marcadores de estrés oxidativo, factores involucrados en la virulencia y determinaciones de polifosfatos. Dentro del proyecto, demostramos que NDH-2 es una enzima periférica de membrana y que interactua con la misma por al menos una hélice anfipática en su región C-terminal. Por deleción de los últimos 43 aminoácidos, fuimos capaces de obtener una variante trunca de NDH-2 soluble en agua y activa. Investigamos las propiedades cinéticas y espectroscópicas de la proteína trunca, usando una preparación pura libre de detergente. Por otra parte, determinamos una inusual expresión del gen ndh y de otros genes del metabolismo aeróbico en fase estacionaria, en medios de cultivo con concentraciones de fosfato >37 mM. Encontramos que las células de E. coli crecidas en dichos medios mantienen un nivel alto de polifosfato en la fase estacionaria tardía, lo que podría dar cuenta de los cambios en la expresión génica y en las actividades enzimáticas que mejoran el estado celular en fase estacionaria con un aumento en la viabilidad y en la resistencia a estrés oxidativo. Recientemente, iniciamos estudios sobre la influencia de la concentración de fosfato en aspectos relacionados a la virulencia bacteriana.