EVALUACION DE LAS PROPIEDADES SUPERFICIALES DE LACTOBACILOS AISLADOS DE RANARIOS

PASTERIS, S.E.; VERA PINGITORE, E.; ROIG BABOT, G.; BUHLER, M.I.; NADER-MACÍAS, M. E.

Tafí del Valle. Tucumán.

Congreso; XXIII JORNADAS DE LA ASOCIACION DE BIOLOGIA DE TUCUMAN. Asistente.; 2006

Asociación de Biología de Tucumán

La ranicultura es una actividad que ha tenido un gran crecimiento en los últimos años  siendo algunas enfermedades, como el síndrome de la pata roja, uno de los principales factores que afectan negativamente los costos de producción. Las mismas son generalmente tratadas con agentes quimioterapéuticos o antimicrobianos. Estos últimos son de uso restringido ya que pueden modificar la microbiota indígena y producir resistencia bacteriana, además del alto costo que representan. Nuestro grupo estudia la aplicación de probióticos para la prevención de infecciones bacterianas en ranarios, y en trabajos previos realizamos el aislamiento de la microbiota indígena de diversas áreas de un criadero de Rana catesbeiana en diferentes estaciones anuales, realizando el relevamiento de sus propiedades inhibitorias. El objetivo de este trabajo fue evaluar las propiedades superficiales de miembros del género Lactobacillus, determinando el grado de hidrofobicidad y hemoaglutinación de la superficie bacteriana, como medida predictiva de su capacidad de adhesión a epitelios. Los ensayos se realizaron en cepas de Lactobacillus aisladas de distintas zonas de un ranario y en diferentes estaciones anuales, previamente seleccionadas por la producción de metabolitos antagónicos (ácidos orgánicos y H2O2). Las cepas fueron crecidas en caldo LAPTg durante 12h a 37°C. Las cultivos fueron centrifugados, lavados y resuspendidos en solución fisiológica (SF) hasta una D.O540=0.7. Para determinar el grado de hidrofobicidad de las superficies bacterianas, se aplicó el método de partición en solventes orgánicos determinándose el grado de hidrofobicidad por la tendencia de los micrroorganismos de pasar de la fase acuosa hacia la orgánica. Fracciones de suspensiones celulares se trataron con hexadecano, se agitaron durante 1 min y se midió la D.O final de la fracción acuosa. El porcentaje de hidrofobicidad se calcula realizando relaciones entre las D.O de las suspensiones celulares sin tratar y tratadas con hexadecano. Se evaluó la capacidad de las cepas de Lactobacillus de hemoaglutinar eritrocitos humanos  (sistema A,B,O) lavados y resuspendidos en SF. Se realizaron diluciones al medio en microplacas de base redonda. Se adicionaron 50 mL de una suspensión al 2% de un pool de eritrocitos. Las placas se incubaron 30 min a 37°C y luego 6 hs a 4°C. El título de hemoaglutinación se calcula como la inversa de la mayor dilución de microrganismos que presenta hemoaglutinación. Los resultados de los ensayos de hidrofobicidad indican que la mayoría de las cepas presentan un grado medio o bajo de hidrofobicidad, posiblemente relacionado con la característica hidrofílica del moco secretado por las glándulas cutáneas de los animales, e indirectamente con la capacidad de adhesión al mismo. Solamente siete cepas fueron capaces de hemoaglutinar. Los mayores títulos fueron observados en las cepas GST27, FZ6´ y AM11, aisladas de piel de animales sanos, EP35A aislada de agua de animales sanos y 9T aislada de alimento balanceado. Las cepas aisladas de animales enfermos presentaron bajos títulos de hemoaglutinación. El análisis conjunto de las propiedades superficiales de las cepas de Lactobacillus y de la producción de sustancias antagónicas, permitió seleccionar un grupo de cuatro cepas que comparten características GRAS (Generally Regarded as Safe): Lactobacillus AM11 y FZ6´, Lactobacillus FZ17 (aislada de agua de animales sanos) y Lactobacillus 9T. Se evaluarán otras propiedades benéficas en estos microorganismos para postular su inclusión en el diseño de un producto probiótico de aplicación en ranarios.