El virus hepatitis C (HCV) inhibe al transportador celular MRP4: rol de las proteínas core y NS5A

BERNARDI A; GENTILE EA; SÁNCHEZ PUCH SI; DELFINO CM1; GÓMEZ N; DAVIO C; MATHET VL; OUBIÑA JR.

C.A.B.A.

Congreso; XX Congreso Argentino de Hepatología; 2019

Asociacion argentina para el estudio de las enfermedades del hígado

Este trabajo fue seleccionado para presentación oral. Se solicitó una versión ampliada del mismo. la que consta en archivo adjunto.--------------------------------------------------------------------------------INTRODUCCIÓN. Las ABC son proteínas de transmembrana relacionadas con el transporte de metabolitos y drogas. Previamente demostramos que el HCV regula diferencialmente MDR1 y BCRP en hepatocitos. Otro miembro de esta familia, MRP4, está localizado en la membrana basolateral de los hepatocitos humanos y es inducido ?compensatoriamente- durante la colestasis, actuando como una bomba de eflujo de ácidos biliares hacia la circulación para ser luego eliminados por vía renal. Niveles elevados de MRP4 han sido detectados luego de la exposición a compuestos hepatotóxicos, lo cual sugiere que tendría una función protectora para el hepatocito.OBJETIVOS. Evaluar el efecto de la replicación del HCV y de la expresión de las proteínas Core y NS5A sobre: a) la expresión del gen mrp4; y b) la actividad del promotor de dicho gen.METODOLOGÍA. Se utilizaron las líneas celulares Huh 7.5 SG (replicón subgenómco del HCV que expresa sólo las proteínas no estructurales del virus) y como control, la línea celular Huh 7.5. Se utilizaron células Huh7.5 para la expresión transitoria del Core o de NS5A. En todos los casos se evaluaron los niveles de expresión de dichas proteínas virales y del ARNm de mrp4 (RT-qPCR) y de su proteína (Western blot). Se evaluó mediante luminiscencia la actividad del Core ó NS5A sobre el promotor del gen mrp4 mediante la cotransfección de plásmidos de Core ó NS5A, con otro conteniendo dicho promotor y el gen reportero luciferasa. RESULTADOS. Se evidenció una disminución de los niveles de expresión del ARNm de mrp4 en la línea celular Huh 7.5 SG (0,7 ± 1,4) respecto a la línea control Huh 7.5 (n=3; p=0,0304).Se observó una disminución en la expresión del gen reportero luciferasa (bajo el control del promotor de mrp4) en las células transfectadas con pNS5A (65,1 ± 6,7) con respecto a las células no transfectadas (n=3, p=0,0065). También se observó una disminución en el porcentaje de actividad relativa de luciferasa en las células transfectadas con Core (33,3 ± 3,8) con respecto a las células no transfectadas (n=3, p