Detección y purificación de proteínas recombinantes mediante una nueva inmuno-etiqueta

PEROTTI, N.; ETCHEVERRIGARAY, M.; KRATJE, R. B.; OGGERO EBERHARDT, M.

Rosario. Pcia. Santa Fe. Argentina

Simposio; 1er Simposio Argentino de los Procesos Biotecnológicos (SAProBio 2010); 2010

Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas-Universidad Nacional de Rosario

La estrategia de etiquetado de proteínas mediante péptidos constituye una herramienta eficaz para detectar, localizar y purificar proteínas recombinantes, eliminando la necesidad de generar anticuerpos específicos para cada proteína objeto de estudio. Los avances en genómica y proteómica funcional justifican la búsqueda de nuevas etiquetas puesto que ningún epitope es ideal para diferentes aplicaciones. Por otro lado, el hallazgo de pequeños epitopes es un aspecto que adquiere máxima relevancia en el diseño de proteínas de fusión cuya integridad funcional no debe ser afectada por la adición de los mismos. Estudios previos [Oggero et al., (2004) Mol Div. 8: 257-269] identificaron el epitope secuencial A1PAR4, derivado del Factor Estimulante de Colonias de Granulocitos y Macrófagos humano (hGM CSF). Dicho péptido fue seleccionado como etiqueta para la preparación de proteínas de fusión por presentar dos características relevantes para la mencionada función: suficientemente pequeño y reconocido por un anticuerpo monoclonal (mAb CC1H7) que presenta capacidad para interaccionar, simultáneamente, con la molécula del hGM-CSF nativa y desnaturalizada. Estas particularidades convierten a dicho epitope peptídico en una potencial etiqueta para el desarrollo de proteínas de fusión, confiriéndoles la propiedad de ser reconocidas mediante procedimientos que conservan la conformación nativa de la proteína o bien implican su parcial o total desnaturalización.