Caracterización de un panel de anticuerpos monoclonales anti-rhEPO

ZENCLUSSEN, M. L.; OGGERO EBERHARDT, M.; KRATJE, R. B.; ETCHEVERRIGARAY, M.

Mar del Plata. Pcia. Buenos Aires. Argentina

Congreso; XLVI Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC) XLIX Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Inmunología (SAI); 2001

Sociedad Argentina de Investigación Clínica - Sociedad Argentina de Inmunología

El presente trabajo muestra la caracterización de un panel de cinco anticuerpos monoclonales (MAbs) anti-Eritropoyetina humana recombinante (rh-EPO). En una primera etapa estudiamos las características cinéticas y metabólicas del crecimiento de hibridomas en un cultivo batch estático durante 12 días con el objeto de evaluar las condiciones óptimas de producción de MAbs. Mediante SDS-PAGE y Western Blot observamos la secreción de fragmentos de inmunoglobulinas y anticuerpos completos en etapas tempranas del cultivo existiendo en días posteriores una adaptación de los hibridomas para producir predominanternente las formas moleculares completas. Por otro lado, la afinidad de las inmunoglobulinas no demostró variaciones significativas durante el cultivo, conservándose aún en la fase de muerte celular cuando las condiciones del medio no son apropiadas para su estabilidad. Luego de establecer las condiciones óptimas de cultivo evaluamos desde el punto cte vista inmunoquírnico la capacidad de cada MAb para interaccionar con rhEPO empleando diversas técnicas: SDS-PAGE nativo y desnaturalizante, isoelectroenfoque, Western Blot y ELISA. Los mencionados estudios demostraron la diferente capacidad de reconocimiento de rhEPO por parte de los MAbs, permitiendo seleccionar aquéllos más apropiados para diferentes propósitos tales como el estudio del perfil de isoformas glicosídicas de rhEPO, su purificación por técnicas de inmunoafinidad y el diseño de métodos de ELISA, entre otros.