Identificación de epitopes de hGM-CSF involucrados en la interacción con su receptor

OGGERO EBERHARDT, M.; KRATJE, R. B.; ETCHEVERRIGARAY, M.

Santa Fe. Pcia. Santa Fe. Argentina

Jornada; V Encuentro de Jóvenes Investigadores de la Universidad Nacional del Litoral; 2001

Secretaría de Ciencia y Técnica – Secretaría de Bienestar Universitario de la Universidad Nacional del Litoral. Federación Universitaria del Litoral

El Factor Estimulante de Colonias de Granulocitos y Macrófagos humano (hGM-CSF) es una glicoproteína que regula la proliferación y diferenciación de precursores celulares hematopoyéticos ejerciendo su actividad biológica a través de la interacción con un receptor celular de alta afinidad (hGM-CSFR). Su eficaz acción farmacológica reside, fundamentalmente, en la reversión de leucopenias secundarias a la terapéutica antitumoral. En este trabajo se describen dos sitios de la molécula de hGM-CSF que participan en la interacción con su receptor, empleando 4 anticuerpos monoclonales (MAbs M1B8, CC5B5, M7E1O y CC1H7) obtenidos a partir de la citoquina no glicosilada expresada en E. coli. La especificidad de los epitopes reconocidos por estos anticuerpos fue analizada mediante técnica de SPOT Síntesis. De esta manera. identificamos los epitopes conformacionales A18E21R23R24F119 y R23E21N17W13 (MAb CC5B5) y el epitope P118F119W13E14 (MAb M1B8). El péptido L61YKQGKLRGSLTK72 fue reconocido por el MAb M7E1O y la secuencia peptídica A1PAR4, correspondiente al extremo N-terminal de la proteína, fue unida por el MAb CC1H7. Ensayos de neutralización de actividad biológica in vitro de hGM-CSF demostraron que los MAbs M1B8, CC5B5 y M7E1O unen dominios de la citoquina responsables de la interacción con hGM-CSFR. En conclusión, nuestros estudios confirmaron la región representada por los aminoácidos 14-24 como área esencial para el reconocimiento del receptor y describieron un nuevo sitio en la vecindad del extremo C-terminal de la hormona, indispensable para el desarrollo de su actividad biológica.