Caracterización de un panel de anticuerpos monoclonales anti-eritropoyetina humana recombinante (rhEPO)

ZENCLUSSEN, M. L.; OGGERO EBERHARDT, M.; ETCHEVERRIGARAY, M.; KRATJE, R. B.

Santa Fe. Pcia. Santa Fe. Argentina

Jornada; V Encuentro de Jóvenes Investigadores de la Universidad Nacional del Litoral; 2001

Secretaría de Ciencia y Técnica – Secretaría de Bienestar Universitario de la Universidad Nacional del Litoral. Federación Universitaria del Litoral

La eritropoyetina es una hormona secretada por el riñón que estimula la formación de glóbulos rojos por la médula ósea. Las diversas glicoformas que la componen poseen diversos grados de sialidación que le otorgan heterogeneidad con respecto a su punto isoeléctrico. Con el objeto de disponer de métodos alternativos de purificación de rhEPO basados en el principio de inmunoafinidad, se clonaron hibridomas productores de anticuerpos monoclonales (MAbs) anti-rhEPO. Se evaluaron los parámetros de producción durante el crecimiento celular de dos de los clones obtenidos (2B2 y 2G10), analizando la variación de la constante de afinidad a medida que avanza el cultivo. Se evaluó además la capacidad de reconocimiento por parte de los MAbs 2B2, 2G10, 3H7, 1E3 y 2G6, de la EPO nativa y desnaturalizada por ensayos de Western Blot, observándose que el MAb 2G10 reconoce mejor a la molécula en su estado nativo. También se determinó el perfil de isoformas glicosídicas de rhEPO reconocidas por cada anticuerpo monoclonal, observándose que los MAbs reconocen un número similar de isoformas. En una etapa final, se purificaron los anticuerpos monoclonales mediante cromatografía de afinidad a proteína A, para estudiar la capacidad neutralizante de la actividad biológica in vitro de la hormona, empleando la línea celular TF-1.