Identificación de diferentes dominios antigénicos del GM-CSF humano mediante el empleo de anticuerpos monoclonales

OGGERO EBERHARDT, M.; KRATJE, R. B.; ETCHEVERRIGARAY, M.

Santa Fe. Pcia. Santa Fe. Argentina

Jornada; III Encuentro de Jóvenes Investigadores de la Universidad Nacional del Litoral; 1999

Secretaría de Ciencia y Técnica – Secretaría de Bienestar Universitario. Universidad Nacional del Litoral. Federación Universitaria del Litoral

El Factor Estimulante de Colonias de Granulocitos y Macrófagos (GM-CSF) es una glicoproteína que forma parte de la familia de citoquinas que exhiben el patrón estructural de 4 segmentos helicoidales. Su administración exógena como medicamento ha demostrado ser eficaz para revertir leucopenias secundarias a la terapia antitumoral. Si bien su estructura tridimensional es conocida, la relación estructura-función del GM-CSF no se conoce detalladamente. En nuestro laboratorio se obtuvo un panel de 8 anticuerpos monoclonales (MAbs) anti GM-CSF recombinante humano aglicosilado con el objeto de realizar el mapeo de la molécula. Los anticuerpos fueron purificados y biotinilados. Los MAbs biotinilados se emplearon en ensayos de inhibición con los MAbs no biotinilados frente a GM-CSF por ELISA. Estos estudios permitieron identificar 4 epitopes diferentes. Dos de ellos, presentes en la molécula desnaturalizada con SDS, se conservaron parcialmente luego de la ruptura de los enlaces disulfuro. Un tercer epitope continuó siendo reconocido luego de ambos tratamientos desnaturalizantes y el cuarto no pudo ser reconocido post-desnaturalización por Western Blot. Finalmente, anticuerpos neutralizantes de la actividad biológica in vitro demostraron la existencia de dos epitopes diferentes involucrados en la unión al receptor. Dado que la interacción y activación del receptor exige la participación de 3 hélices de la molécula de GM-CSF, nuestros MAbs mapearían zonas funcionalmente diferentes situadas en dichos arreglos helicoidales.