Cuantificación de GM-CSF humano recombinante destinada al seguimiento de su producción en procesos biotecnológicos

BOLLATI FOGOLÍN M. R.; OGGERO EBERHARDT, M.; KRATJE, R. B.; ETCHEVERRIGARAY, M.

Mendoza. Argentina

Congreso; XXXIV Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación en Bioquímica y Biología Molecular (SAIB); 1998

Sociedad Argentina de Investigación en Bioquímica y Biología Molecular

El Factor Estimulante de Colonias de Granulocitos y Macrófagos (GM-CSF) es una glicoproteína que activa el crecimiento y diferenciación de células progenitoras hematopoyéticas, empleado para prevenir o revertir leucopenias secundarias a la quimioterapia. Esta citoquina fue expresada en diferentes sistemas huésped: bacterias, levaduras, células de insectos y células de mamífero, presentando todas ellas actividad biológica. En el presente trabajo se comparan diferentes técnicas puestas a punto en el laboratorio con el objeto de determinar su concentración durante el proceso biotecnológico utilizado para su producción, desde el screening de las líneas celulares transfectadas, las diferentes etapas de purificación y el producto final. Con ese fin, se desarrollaron: i) Métodos inmunoquímicos (inmunodot, ELISA sandwich y ELISA competitivo) empleando anticuerpos monoclonales murinos (MAb) y policlonales de conejos, ambos obtenidos por inmunización con GM-CSF aglicosilado; y ii) Técnicas que permiten su cuantificación evaluando su efecto biológico sobre la línea celular TF-1, cuyo crecimiento es dependiente de esta citoquina. El ensayo de valoración biológica del GM-CSF demuestra la mayor sensibilidad (0,02 ng/ml). Sin embargo, dado que el ELISA sandwich combina una mayor simplicidad metodológica con una muy buena sensibilidad (0,78 ng/ml), resulta ser el más apropiado para su cuantificación en el proceso biotecnológico mencionado. Los ensayos de inmunodot son de rápida ejecución pero su sensibilidad es considerablemente más baja (60-500 ng/ml), siendo apto exclusivamente como método de screening.