Obtención y caracterización de un panel de anticuerpos monoclonales para el estudio inmunoquímico del factor estimulante de colonias de granulocitos y macrófagos (GM-CSF)

OGGERO EBERHARDT, M.; KRATJE, R. B.; ETCHEVERRIGARAY, M.

San Bernardino. Paraguay

Jornada; Quintas Jornadas de Investigación del Grupo Montevideo; 1997

Asociación de Universidades Grupo Montevideo

El GM CSF humano es una glicoproteína que activa la proliferación, diferenciación y compromiso de las células precursoras hematopoyéticas. Su administración exógena como medicamento ha demostrado ser eficaz para revertir leucopenias o para prevenir leucopenias resultantes de la toxicidad de ciertas drogas como las empleadas en el tratamiento quimioterápico de las enfermedades tumorales. A pesar de las diferencias estructurales, ha sido demostrado que la forma aglicosilada del GM-CSF es activa tanto in vitro como in vivo. Sin embargo se ha observado que la administración clínica de GM-CSF no glicosilado o parcialmente glicosilado, genera el desarrollo de anticuerpos anti GM-CSF que determinarían la ineficacia de tratamientos periódicos o prolongados en el tiempo. Con el objeto de realizar el estudio inmunoquímico de GM CSF recombinante humano producido en diferentes sistemas huésped, se planteó la necesidad de obtener un panel de anticuerpos monoclonales. Para el desarrollo de hibridomas productores de anticuerpos monoclonales anti GM CSF, se inmunizaron ratones BALB/c. El título de anticuerpos específicos en plasma de ratón, dosados por ELISA indirecto fue 1/100.000. Luego de un período de descanso de 15 días a 4 meses se realizó la fusión de las células de bazo del ratón inmunizado con células de mieloma no secretor de ratón (NSO). Seis líneas celulares productoras de anticuerpos monoclonales específicos fueron clonadas por el método de dilución límite. Un clon de cada línea celular fue amplificado in vitro e in vivo. Se determinó el título de anticuerpos específicos anti GM-CSF mediante un ELISA indirecto mediado por antígeno y se cuantificó las inmunoglobulinas murinas por técnica de ELISA sandwich con anticuerpos policlonales de conejo. Finalmente, se caracterizó la variedad de clase y subclase de inmunoglobulinas. Por error, no se incluyó el trabajo en el libro de resúmenes, por lo que se adjunta la ficha de inscripción