Adaptación del hibridoma productor de un anticuerpo monoclonal anti-rhEPO a medio libre de suero para su producción in vitro a mayor escala

WANDEL-PETERSEN, V; OGGERO, M; BÜRGI, M

Santa Fe

Encuentro; XXIII Encuentro de Jóvenes Investigadores de la UNL; 2019

Universidad Nacional del Litoral (UNL)

En nuestro laboratorio se desarrolla un proyecto consistente en la modificación de la molécula de eritropoyetina humana recombinante (rhEPO), con el fin de mejorar sus propiedades como bioterapéutico para el tratamiento de enfermedades neurodegenerativas. Para ello, se generaron distintas variantes hiperglicosiladas de rhEPO, carentes de actividad eritropoyética, las cuales han sido extensamente caracterizadas, restando el estudio de sus propiedades farmacocinéticas (PK).Habitualmente, la PK de estas moléculas es monitoreada mediante la determinación de la actividad eritropoyética, pero debido que las mismas carecen de dicha actividad, es necesario el empleo de otro método. En este aspecto, hemos optimizadoun ELISA sándwich, aumentando su límite de detección, útil paramonitorear la depuración plasmática de rEPO y sus variantes. El ensayo optimizado requiere grandes cantidades del reactivo mAb 2B2 (anticuerpo monoclonal anti-rEPO), el cual también es indispensable para generar las matrices destinadas a la purificación de las muteínas mediante cromatografía de inmunoafinidad. Hasta el momento, el anticuerpo 2B2 anti-EPO desarrollado en nuestro laboratorio, era producido in vivo, en líquido ascítico, mediante el empleo de animales de experimentación, ya que ésta representa la forma más rápida de obtener grandes cantidades de anticuerpos. Con el fin de obtener anticuerpos homogéneos, reproducibles, cuya producción pueda realizarse de manera continua, en grandes cantidades y prescindiendo del uso de animales y sus derivados, se procedió a la adaptación del hibridoma 2B2 a un medio de cultivo libre del empleo de suero fetal bovino (SFB) para su producción a mayor escala in vitro.