Desarrollo de un ensayo de gen reportero para la cuantificación de IFNs-I e identificación de compuestos moduladores de su potencia biológica

BURGI, MARÍA DE LOS MILAGROS; OGGERO, MARCOS; PRIETO, CLAUDIO; ETCHEVERRIGARAY, MARINA; KRATJE, RICARDO; BOLLATI-FOGOLÍN, MARIELA

Santa Fe

Simposio; 3º Simposio Argentino de Procesos Biotecnológicos; 2014

Universidad Nacional del Litoral

"Los interferones (IFNs) constituyen una familia de citoquinas glicosiladas, específicas de especie, que representan moléculas claves del sistema inmune innato y adquirido. Presentan actividad antiviral, antiproliferativa e inmunomoduladora. Por este motivo son empleados como biofármacos. Actualmente, los ensayos destinados a la detección y cuantificación de la actividad de los IFNs son lentos y complejos, dado el empleo de virus. De este modo, el desarrollo de métodos sencillos, robustos, versátiles y rápidos resulta de gran utilidad para evitar dichas desventajas. En este trabajo se muestra el desarrollo de un ensayo de gen reportero (EGR, WISH Mx/eGFP) basado en el uso de la línea celular WISH que consta de un promotor inducible por IFNs de tipo I (principalmente IFN-α e IFN-β) y de la secuencia codificante de la proteína verde fluorescente (eGFP). La evaluación mediante citometría de flujo del porcentaje de células que expresan eGFP se correlaciona en forma directa con las concentraciones de IFN ensayadas. Por su parte, el IFN-α presenta un comportamiento dual desde el punto de vista clínico, resultando de interés incrementar su eficiencia terapéutica en aquellas patologías que requieren su administración reiterada y en altas dosis o, por el contrario, disminuir o bloquear sus efectos secundarios en aquellas enfermedades en las que el mismo es generado por el individuo, constituyendo parte de su etiología. Encontrar moléculas con dichas características podría contribuir al tratamiento de diversas patologías. En este sentido, la línea reportera desarrollada fue utilizada para monitorear bibliotecas de compuestos en la búsqueda de potenciales moduladores de la actividad de los IFNs-I. Así, se identificaron compuestos inhibidores y compuestos potenciadores de la actividad biológica de la citoquina de interés. Finalmente, algunos de estos compuestos fueron seleccionados para su caracterización en términos de su dosis efectiva, toxicidad y efecto residual empleando el mismo EGR."