INVESTIGADORES
OGGERO EBERHARDT Marcos Rafael
congresos y reuniones científicas
Título:
Estudio de la capacidad neutralizante de la actividad biológica in vitro del GM-CSF producido en diferentes sistemas huésped mediante anticuerpos monoclonales
Autor/es:
OGGERO EBERHARDT, M.; KRATJE, R. B.; ETCHEVERRIGARAY, M.
Lugar:
Villa Giardino. Pcia. Córdoba
Reunión:
Congreso; XXXIII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación en Bioquímica y Biología Molecular (SAIB); 1997
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Investigación en Bioquímica y Biología
Resumen:
El GM-CSF es una citoquina glicoproteica cuya administración exógena es eficaz para prevenir o revertir leucopenias secundarias a la terapia antioncológica. Se ha expresado en distintos sistemas huésped: bacterias, levaduras y células de mamífero, rindiendo productos químicamente diferentes debido a la variable estructura glicosídica. Pacientes sometidos a tratamiento con la hormona comercial no glicosilada desarrollan anticuerpos y respuestas indeseables que podrían atribuirse a la falta de glicosilación de la molécula. Con el fin de estudiar dicho efecto se produjo un panel de anticuerpos monoclonales con GM-CSF aglicosilado, el que se caracterizó desde el punto de vista inmunoquímico determinándose por ELISA los isotipos y sus afinidades. Las IgGs se purificaron a partir de ascitis por cromatografía de afinidad a proteína A y las IgMs, por gel filtration en Sephacryl S-200. Los MAbs purificados se biotinilaron para ser utilizados en experimentos de competición, con el fin de establecer epitopes involucrados en la unión al receptor. Mediante ensayos de actividad biológica in vitro en células de eritroleucemia humana (TF-1), se analizó la capacidad neutralizante de los MAbs frente a la hormona glicosilada y no glicosilada. Se obtuvieron MAbs neutralizantes y no neutralizantes. Los MAbs neutralizantes reaccionaron con ambas variantes de GM-CSF con distinta afinidad, demostrando comportamiento de cruce o heteroclítico. Experimentos de competición entre los MAbs neutralizantes y los anticuerpos presentes en sueros de pacientes permitirían la elección del sistema huésped para la producción de esta proteína recombinante.
