Desarrollo de anticuerpos monoclonales anti hIFN-alfa con fines terapéuticos

DEPETRIS, M.; OGGERO EBERHARDT, M.; CASALIS, P.; ETCHEVERRIGARAY, M.; KRATJE, R. B.

Buenos Aires

Congreso; X Congreso Argentino de Farmacia y Bioquímica Industrial; 2005

Asociación Argentina de Farmacia y Bioquímica Industrial

Introducción: El empleo de anticuerpos monoclonales (mAbs) como agentes terapéuticos ha generado una gran aceptación en el mercado de productos biofarmacéuticos, avalada por la aprobación de diversos anticuerpos para uso humano y la existencia de una gran variedad de los mismos en etapas finales de ensayos clínicos. Por otro lado, se ha observado que el incremento en la expresión de Interferón alfa humano (hIFN ) se correlaciona con procesos infecciosos agudos de origen viral junto a enfermedades de naturaleza autoinmune y desórdenes inflamatorios, incluyendo lupus eritematoso sistémico, diabetes mellitus tipo I, artritis reumatoidea, esclerosis múltiple, anemia aplásica, SIDA y enfermedades de inmunodeficiencia combinada severas. En todos estos casos, existen evidencias que señalan al hIFN  como responsable del inicio y/o mantenimiento de la sintomatología, convirtiéndolo en un blanco atractivo para el desarrollo de estrategias terapéuticas basadas en el empleo de anticuerpos monoclonales neutralizantes de la actividad biológica de la citoquina. Materiales y métodos: Se preparó un panel de mAbs murinos anti IFN 2b, caracterizándose desde el punto de vista de su especificidad, afinidad, capacidad de reconocimiento de diferentes áreas moleculares mediante técnica de ELISA y habilidad neutralizante de la actividad biológica antiviral y antiproliferativa in vitro de la citoquina. Debido a la elevada inmunogenicidad que presentan los anticuerpos murinos, limitando su utilidad en el tratamiento de enfermedades crónicas, se seleccionó uno de los mAbs para la producción del correspondiente fragmento variable de cadena única (scFv) expresándose en forma soluble a partir de cultivos de E. coli HB2151. Resultados y conclusiones: Se obtuvo un panel constituido por 11 mAbs, los cuales exhibieron capacidad para reconocer a la citoquina en su estado nativo, observándose un rango de afinidades que osciló entre 1,7.107 M-1 y 1,4.1010 M-1. Con el objeto de describir la especificidad de los epitopes reconocidos por cada mAb, se desarrollaron ensayos de competición entre pares de anticuerpos delimitándose 4 áreas relativamente diferentes de la molécula mapeadas por los anticuerpos del panel. Ensayos de neutralización de la actividad biológica in vitro del rhIFN 2b demostraron que 6 de los mAbs (CB27H2, CA1A3, CB15D7, CA2G7, CA5E6 y CB29D3) exhibieron en forma equivalente, capacidad para inhibir la actividad biológica antiviral y antiproliferativa del rhIFN 2b, siendo el anticuerpo CB27H2 el que demostró mayor acción neutralizante en ambos casos. Teniendo en cuenta la habilidad neutralizante de la actividad biológica in vitro del IFN 2b, la capacidad para mapear diferentes áreas moleculares de la citoquina y el valor de sus constantes de afinidad, los mAbs CA1A3, CB27H2, CB15D7 y CA5E6 fueron seleccionados para la preparación de fragmentos scFv. En primera instancia, se obtuvo el fragmento scFv-CB27H2, determinándose sus valores de afinidad y capacidad neutralizante de la actividad biológica antiviral in vitro. Los fragmentos obtenidos resultan adecuados para ser utilizados en estudios posteriores tendientes a su aplicación clínica.