INVESTIGADORES
OGGERO EBERHARDT Marcos Rafael
congresos y reuniones científicas
Título:
Obtención y selección de anticuerpos monoclonales para la cuantificación y purificación de la hormona folículo estimulante humana recombinante (rhFSH)
Autor/es:
BÜRGI FISSOLO, M.; OGGERO EBERHARDT, M.; ETCHEVERRIGARAY, M.
Lugar:
Rosario. Pcia. Santa Fe. Argentina
Reunión:
Congreso; II Congreso Internacional REDBIO?Argentina: La Biotecnología y los Futuros Escenarios Mundiales; 2009
Institución organizadora:
Fundación REDBIO Internacional; NR; ANPCYT; CONICET, INTA; INTI, FAO; FAB
Resumen:
La hormona folículo estimulante es una glicoproteína heterodimérica que regula los procesos reproductivos. Cuando se encuentra en bajas concentraciones genera problemas de infertilidad. Para uso terapéutico, la hormona recombinante se produce en cultivos celulares y debe purificarse a homogeneidad. La cromatografía de inmunoafinidad empleando anticuerpos monoclonales (mAbs) es una de las herramientas más eficientes ya que presenta numerosas ventajas. En este trabajo se obtuvo y caracterizó un panel de mAbs anti rhFSH denominados F1CP3A8, F1CP1B3 y F3CP2E3. Los tres presentaron constantes de afinidad del orden de 109 nM-1. Al evaluar los anticuerpos como reactivos para el desarrollo de técnicas de ELISA de competición y sandwich que permitan cuantificar rhFSH, se concluyó que los tres mAbs son aptos para enzimoinmunoensayos de competición, exhibiendo límites de detección adecuados (20 ng/ml, 10 ng/ml y 60 ng/ml). Contrariamente, para el modelo de ELISA sandwich, sólo el mAb F1CP3A8 demostró ser útil como anticuerpo de captura, con un límite de detección que supera entre 10 y 60 veces a los ELISAs de competición. Esto lo convierte en el sistema de elección para cuantificar la hormona en sistemas con bajos niveles de expresión. Se ensayaron distintas variables para la purificación de rhFSH por cromatografía de inmunoafinidad empleando los mAbs F1CP1B3 y F1CP3A8. Los mejores resultados se obtuvieron con el mAb F1CP3A8, realizando una etapa de elución ácida a pH 3,5 la cual permitió recuperar el 73% de la proteína heterodimérica con una pureza superior al 90%, en un procedimiento de purificación en una única etapa.
