Valoración biológica de interferones de tipo I: un ensayo alternativo

BÜRGI FISSOLO, M.; PRIETO, C.; OGGERO EBERHARDT, M.; BOLLATI FOGOLÍN M. R.; ETCHEVERRIGARAY, M.; KRATJE, R. B.

Ciudad Autónoma de Buenos Aires. Argentina

Congreso; BIOLATINA 2010 - Bioeconomía e Innovación: un nuevo desafío IX Feria - Congreso Latinoamericano de Biotecnología y IV Congreso Argentino de Biotecnología; 2010

Foro Argentino de Biotecnología

Los interferones (IFNs) constituyen una familia de proteínas especie específicas, sintetizadas en respuesta a virus y otros estímulos antigénicos. Poseen actividad antiviral, antiproliferativa e inmunomoduladora. Actualmente, los ensayos destinados a la detección de actividad de los IFNs son lentos, tediosos y emplean virus (AVA: anti viral assay). Por ese motivo, el desarrollo de métodos sencillos, robustos, versátiles y rápidos resulta de gran utilidad para evitar dichas desventajas. En este trabajo desarrollamos un sistema reportero (WISH Mx/eGFP) que consta de un promotor inducible por IFNs y de la secuencia codificante de la proteína eGFP. La evaluación mediante citometría de flujo del porcentaje de células que expresan GFP se correlaciona en forma directa con las concentraciones de IFN ensayadas. Este sistema presenta numerosas ventajas. Por un lado, el gen reportero es una proteína sumamente estable, fácilmente cuantificable y no necesita de un sustrato para poder detectarla, lo que disminuye el costo del ensayo. Además, es un ensayo rápido, sencillo de realizar y altamente específico. Es un sistema sensible, con un amplio rango de linealidad. Presenta CV% inferiores a los obtenidos en el ensayo AVA, lo que refleja menores variaciones inter e intra ensayo. Asimismo, representa una alternativa biológicamente segura, ya que no emplea virus. En conclusión, hemos desarrollado un sistema reportero, que permite determinar la potencia de los IFNs de manera simple, rápida, precisa, sensible, segura y a bajo costo constituyendo un método apropiado para reemplazar los bioensayos convencionales.