Desarrollo de una nueva herramienta biológica para determinar la potencia de los interferones de tipo I

BÜRGI FISSOLO, M.; PRIETO, C.; OGGERO EBERHARDT, M.; BOLLATI FOGOLÍN M. R.; ETCHEVERRIGARAY, M.; KRATJE, R. B.

Montevideo.

Simposio; IV Seminario Latinoamericano de Tecnología de Cultivo de Células (IV SLATCC); 2010

Institut Pasteur de Montevideo

Los interferones (IFN) son citoquinas con actividad antiviral, antiproliferativa e inmunomoduladora. Para medir su potencia habitualmente se emplean ensayos de actividad antiviral. Los mismos presentan altas variaciones, consumen tiempo y emplean virus. Una alternativa es el empleo de ensayos con genes reporteros, los cuales son altamente específicos y sensibles. El sistema reportero que hemos desarrollado (WISH Mx/eGFP) consta de un promotor inducible por IFNs y de la secuencia codificante de la proteína e-Green Floresceine Pretein (e-GFP), de modo que la cantidad de células activadas se correlaciona con la cantidad de IFN presente en la muestra. Este método presenta numerosas ventajas, a saber: es un ensayo rápido, ya que en 30 h puede determinarse el valor máximo de GFP; es sencillo de realizar y altamente específico; muestra un amplio rango de linealidad: para los IFNs de tipo beta desde 0,32 UI/ml hasta 750 UI/ml, y para los de tipo alfa desde 1,2 UI/ml hasta 1.400 UI/ml; exhibe un límite de detección de 0,04 UI/ml; es preciso, ya que presenta coeficientes de variación inter e intra ensayo inferiores al 20%. De acuerdo con los ensayos realizados aplicando ambos métodos, los valores de potencia cuantificados para cada IFN coinciden. Además, permite cuantificar la potencia de todos los IFNs de tipo I: IFN beta1a, beta1b, alfa2a y alfa2b. Al no emplear virus, representa una alternativa biológicamente segura. El clon seleccionado resultó estable ya que mantiene su comportamiento durante 50 generaciones (equivalente a 2 meses de pasajes sucesivos en cultivo). En conclusión, con este trabajo demostramos el desarrollo de una alternativa para el análisis de los IFNs de tipo I, en el que la performance del ensayo, utilizando la línea WISH-Mx/eGFP, unida a su simplicidad, rapidez, bajo costo, precisión, sensibilidad y seguridad, hacen del mismo un candidato apropiado para reemplazar los bioensayos convencionales.