Nuevas estrategias para la glicosilación en cultivos celulares de moléculas de rhIFN alfa2b

GUGLIOTTA, A.; CEAGLIO, N.; OGGERO EBERHARDT, M.; ETCHEVERRIGARAY, M.; KRATJE, R. B.

Montevideo.

Simposio; IV Seminario Latinoamericano de Tecnología de Cultivo de Células (IV SLATCC); 2010

Institut Pasteur de Montevideo

Actualmente, se describe a los interferones como una familia de proteínas secretadas por células eucariotas en respuesta a virus y otros estímulos antigénicos. El IFN alfa2b constituye una de las citoquinas más estudiadas debido a que presenta un amplio espectro de actividades biológicas: antiviral, antiproliferativa e inmunomoduladora. Si bien se emplea para el tratamiento de diversas enfermedades virales y tumorales, su rápida eliminación sistémica requiere el uso de dosis elevadas y frecuentes, resultando en efectos colaterales indeseados. En este trabajo se presenta la construcción de moléculas hiperglicosiladas de rhIFN alfa2b con un mayor grado de N-glicosilación y, en consecuencia, mayor vida media plasmática con respecto a la citoquina con cuatro sitios de N-glicosilación (IFN-4N), previamente obtenida en nuestro laboratorio. Para ello, se construyeron nuevas muteínas del hIFN alfa2b con 5 y 6 sitios consenso de N-glicosilación y se expresaron en células CHO.K1. Para la introducción de dichos sitios se emplearon dos estrategias: 1) Modificación de residuos puntuales de la molécula de IFN-4N y 2) Adición de un péptido conteniendo dos de dichas secuencias en el extremo N-terminal de la misma. Las nuevas variantes fueron evaluadas en cuanto a su grado de glicosilación y actividad biológica antiviral y antiproliferativa in vitro, seleccionándose dos de ellas para su producción, purificación y evaluación farmacocinética en animales de experimentación. Los resultados obtenidos evidenciaron que el incremento de la glicosilación condujo a una leve disminución de la actividad biológica específica in vitro de las citoquinas y una marcada mejora de sus propiedades farmacocinéticas. Teniendo en cuenta que se ha demostrado que el tiempo de residencia en plasma del hIFN-alfa2b posee una mayor influencia sobre su actividad in vivo que su afinidad hacia el receptor, las muteínas obtenidas podrían constituir promisorios agentes con mayor eficacia terapéutica.