Identificación de compuestos inhibidores de la actividad biológica del IFN-α humano y su caracterización mediante el empleo de un nuevo ensayo de genes reporteros

BURGI, MARÍA DE LOS MILAGROS; PRIETO, CLAUDIO; PORRO, VALENTINA; KRATJE, RICARDO; CABRERA, N; HERNÁNDEZ, P; CERECETTO, H; GONZÁLEZ, M; OGGERO, MARCOS; BOLLATI FOGOLÍN, MARIELA

Valparaíso

Simposio; VI Simposio Latinoamericano de Tecnología de Cultivos Celulares; 2014

Pontificia Universidad Católica de Valparaíso

Ciertas patologías de origen autoinmune y, en particular, el Lupus Eritematoso Sistémico (LES), han demostraron una producción excesiva de Interferón-α (IFN-α) responsable de gran parte de los signos y síntomas de la enfermedad. Es por esto que resulta de gran interés identificar moléculas capaces de inhibir la actividad biológica de la citoquina. Mediante el empleo de una línea celular reportera de la actividad de los IFNs tipo I humano (hIFNs-I), denominada WISH-Mx2EGFP y que fuera previamente desarrollada en nuestro laboratorio, se analizaron 88 compuestos sintéticos provenientes de una Quimioteca del grupo de Química Medicinal de la Facultad de Ciencias, Universidad de la República, Montevideo, Uruguay. En dicha línea celular, la expresión de la proteína reportera EGFP está dirigida por el promotor Mx2, inducible específicamente por IFNs-I. De esta forma, el porcentaje de EGFP se correlaciona directamente con la cantidad de IFN presente en la muestra analizada. Comparando el porcentaje de células que expresan la EGFP obtenido en presencia y ausencia de los compuestos, pudieron identificarse 10 moléculas inhibidoras de la actividad del IFN, las cuales fueron caracterizadas en función de su toxicidad, dosis efectiva, efecto sobre la actividad biológica antiproliferativa y antiviral de los hIFNs, efecto sobre el ciclo celular y apoptosis. Finalmente, se analizó el efecto cooperativo de 5 de ellos para inhibir la actividad de los hIFNs-I mediante el ensayo de gen reportero. Dicho efecto fue corroborado mediante procedimientos de evaluación de actividad antiviral y antiproliferativa, avalando la capacidad del ensayo reportero para identificar y caracterizar sustancias con acción inhibidora de la actividad de tales hIFNs. Asimismo, fue posible hallar candidatos para un futuro desarrollo de potenciales compuestos terapéuticos específicos para la bloquear la citoquina en estudio en patologías tales como el LES.