O GLICOSILACIÓN: UNA ESTRATEGIA PARA MEJORAR PROPIEDADES BIOLÓGICAS DEL rhIFN-alfa2b

TARDIVO, BELÉN; NATALIA CEAGLIO; CRAVERO, DIANELA; ETCHEVERRIGARAY, MARINA; KRATJE, RICARDO; OGGERO, MARCOS

Valparaíso

Simposio; VI Simposio Latinoamericano de Tecnología de Cultivos Celulares; 2014

Pontificia Universidad Católica de Valparaíso

La principal desventaja del interferón alfa-2b humano recombinante (rhIFN α2b) producido en bacterias para el tratamiento de enfermedades virales y tumorales, radica en la aparición de efectos adversos causados por las múltiples y elevadas dosis que deben aplicarse debido a su rápida eliminación sanguínea. Dada la capacidad de los glúcidos para disminuir el clearance de glicoproteínas, se diseñó una variante de rhIFN α2b fusionando el péptido CTP, derivado de la gonadotropina coriónica humana, al extremo N- y C-terminal de la citoquina, incorporando así ocho sitios potenciales de O glicosilación. Esta variante se expresó en células CHO-K1 y se purificó mediante cromatografía de inmunoafinidad para proceder a su caracterización. Este trabajo se realizó en comparación con las muteínas CTP-IFN e IFN-CTP, previamente desarrolladas. Se observó que la actividad biológica específica (ABE) antiviral del CTP-IFN-CTP representó un 68 y 77% de la correspondiente a CTP-IFN e IFN-CTP, mientras que la ABE antiproliferativa fue de 45 y 33%. Este mayor descenso confirma la existencia de distintas regiones moleculares responsables de tales actividades. Ensayos de SDS-PAGE e isoelectroenfoque demostraron un perfil de masa molecular mayor, con una gran proporción de isoformas ácidas para la variante CTP IFN-CTP con respecto a CTP-IFN e IFN-CTP, probablemente debido a un mayor contenido de ácido siálico. Por otro lado, ensayos farmacocinéticos demostraron que CTP-IFN-CTP alcanzó su concentración máxima 4 h después que CTP-IFN e IFN-CTP y se eliminó del plasma más lentamente. Asimismo, ensayos de estabilidad térmica y de acción de proteasas in vitro, demostraron que la variante altamente glicosilada conservó mayor ABE antiviral a temperaturas superiores a los 65 ºC (60%) y mayor estabilidad en plasma que la molécula no modificada. Estos resultados permiten concluir que la O glicoingeniería constituye una metodología eficaz para modificar las propiedades del rhIFN-α2b que resultarán de vital interés para incrementar su actividad biológica in vivo.