DISEÑO Y CARACTERIZACIÓN DE NUEVAS MUTEÍNAS DE IFN-α2B CON PROPIEDADES MEJORADAS RESPECTO AL IFN4N

GUGLIOTTA, AGUSTINA; CEAGLIO, NATALIA; ETCHEVERRIGARAY, MARINA; KRATJE, RICARDO; OGGERO, MARCOS

Valparaíso

Simposio; VI Simposio Latinoamericano de Tecnología de Cultivos Celulares; 2014

Pontificia Universidad Católica de Valparaíso

La glicoingeniería ha permitido mejorar las propiedades fisicoquímicas y biológicas de proteínas recombinantes, logrando de este modo incrementar la eficacia de numerosos agentes terapéuticos. El IFN4N es una muteína del IFN α2b humano desarrollada en nuestro laboratorio mediante la incorporación de cuatro sitios susceptibles de N glicosilación. Presenta mayor masa molecular y mejores propiedades farmacocinéticas y actividad antitumoral in vivo respecto a la variante no glicosilada. Sin embargo, exhibe inferior actividad biológica específica (ABE) antiviral y antiproliferativa in vitro. En el presente trabajo se propuso generar nuevas muteínas empleando dos estrategias que, en combinación, permitan mejorar la actividad biológica in vivo del IFN4N. Por un lado, incrementar su ABE in vitro, mediante supresión de la mutación R23N, la cual, si bien permitió obtener un sitio consenso de N glicosilación, provocó un drástico descenso de su ABE antiproliferativa. Por otro lado, se planteó aumentar el contenido de glúcidos para prolongar su residencia plasmática, usando dos metodologías: mutuación puntual de aminoácidos para generar nuevas secuencias consenso o incorporación de un nonapéptido conteniendo dos sitios en el extremo N-terminal de la proteína. Así, se construyeron 12 muteínas enmarcadas en tres grupos: A) muteínas con similar grado de glicosilación y mayor ABE in vitro respecto del IFN4N, B) muteínas con superior grado de glicosilación e igual o inferior ABE in vitro y C) muteínas con un grado de glicosilación y ABE in vitro incrementados. Todas las muteínas expresadas en células CHO-K1 evidenciaron características mejoradas respecto del IFN4N, ya sea incremento del grado de glicosilación, observado mediante SDS-PAGE/western blot, y ABE antiproliferativa in vitro hasta 7 veces mayor. En particular, se identificaron 6 variantes de gran interés a los fines de estudiar si el incremento de la glicosilación o bien de la actividad antiproliferativa in vitro presentan mayor influencia sobre la actividad antitumoral in vivo del hIFN α2b.