CARACTERIZACIÓN DE UNA VARIANTE HIPERGLICOSILADA DE IFN-α2B PRODUCIDA EN DIFERENTES LÍNEAS CELULARES

GUGLIOTTA, AGUSTINA; RAUD, BRENDA; OGGERO, MARCOS; KRATJE, RICARDO; ETCHEVERRIGARAY, MARINA; CEAGLIO, NATALIA

Valparaíso

Simposio; VI Simposio Latinoamericano de Tecnología de Cultivos Celulares; 2014

Pontificia Universidad Católica de Valparaíso

Los patrones de glicosilación de las proteínas son altamente dependientes del sistema celular en el cual se expresan. Esto es particularmente importante en la selección de plataformas para la producción de bioterapéuticos, ya que las diferencias establecidas por el sistema elegido pueden tener efectos sobre las propiedades biológicas de los mismos. Por este motivo, en este trabajo se propuso evaluar el impacto del sistema de expresión sobre la actividad biológica específica (ABE) in vitro y la composición de los glúcidos presentes en una muteína derivada de interferón-α2 que contiene 4 sitios de N glicosilación (IFN4N). La producción de IFN4N se llevó a cabo en condiciones de adherencia empleando células CHO-K1 (C-IFN4N), que constituyen la plataforma más utilizada en la industria para la producción de glicoproteínas terapéuticas, y células HEK293T (H IFN4N). Mediante cromatografía de inmunoafinidad, ambas moléculas fueron purificadas a partir de sobrenadantes de cultivo, obteniéndose elevados rendimientos (> 70%) y una pureza superior al 90%. La caracterización de ambas moléculas evidenció notables diferencias en su perfil de glicosilación evaluado mediante SDS-PAGE e isoelectroenfoque. El C IFN4N exhibió una masa molecular promedio mayor con respecto al H-IFN4N y presentó una mayor proporción de glicoformas acídicas, lo cual coincidió con un contenido de ácido siálico dos veces superior respecto al H IFN4N. Además, el análisis de los glicanos cargados mediante cromatografía de intercambio aniónico débil (WAX) demostró una elevada proporción de moléculas no cargadas y monosialiladas (65%) para el H-IFN4N, mientras que para el C IFN4N predominaron las estructuras bi-, tri- y tetrasialiladas (75%). Por otra parte, la ABE antiproliferativa in vitro del H-IFN4N fue dos veces mayor que la correspondiente al C-IFN4N, no observándose diferencias en la ABE antiviral. Estos resultados promueven el estudio farmacocinético de ambas variantes, para determinar el impacto de las mencionadas diferencias sobre las propiedades in vivo del IFN4N.