Desarrollo de sistemas reporteros para la determinación de la potencia de Interferones de tipo I empleando diferentes linajes celulares humanos

BURGI, MARÍA DE LOS MILAGROS; PRIETO, CLAUDIO; OGGERO, MARCOS; BOLLATI FOGOLÍN, MARIELA; ETCHEVERRIGARAY, MARINA; KRATJE, RICARDO

Santa Fe

Simposio; V Simposio Latinoamericano de Cultivos Celulares (V SLATCC).; 2012

Laboratorio de Cultivos Celulares. Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas. Universidad Nacional del Litoral

Los interferones (IFNs) son proteínas con acción antiproliferativa, antiviral e inmunomoduladora. Se emplean como biofármacos y su actividad es evaluada mediante ensayos antivirales, los cuales, además de exhibir altas variaciones intra- e inter-ensayos, emplean virus durante su desarrollo. El objetivo de este trabajo fue generar nuevas líneas celulares reporteras, derivadas de diferentes tejidos humanos, utilizando el gen de la proteína verde fluorescente (eGFP) controlado por el promotor Mx2 inducible específicamente por IFNs de tipo I. De esta forma, obtuvimos las líneas A549-Mx2/eGFP, HeLa-Mx2/eGFP, HEp-2-Mx2/eGFP y WISH-Mx2/eGFP por transfección con el vector pMx2/eGFP. Las mismas fueron seleccionadas en presencia de neomicina durante 7 días, clonadas por el método de dilución límite, procediéndose finalmente a seleccionar los mejores clones respondedores. En todos los casos, se obtuvo un aumento de eGFP (medido por citometría de flujo) proporcional al incremento de IFN agregado, alcanzándose valores que oscilaron entre 25 y 85% de células activadas, dependiendo de cada línea celular y de cada tipo de IFN evaluado. La secuencia promotora Mx2 respondió específica y cuantitativamente a los IFNs de tipo I. No se observaron diferencias significativas en los límites de detección al comparar las respuestas de las distintas líneas celulares frente a los subtipos de IFN-alfa. Contrariamente, se verificaron variaciones en tales límites al comparar la actividad de los subtipos de IFN-β en las líneas HEp-2. Asimismo, la línea A549 mostró el mayor límite de detección. En conclusión, estos ensayos representan métodos rápidos, sensibles, seguros y reproducibles para determinar la actividad biológica del IFN-alfa e IFN-beta, constituyendo, además, sistemas reporteros alternativos y posibles candidatos para evaluar la vía de acción de los IFNs sobre células originadas a partir de diferentes tejidos humanos.