Desarrollo de una estrategia de purificación de proteínas utilizando un péptido bifuncional

LEOPOLD, MJ.; OGGERO EBERHARDT, M.; CEAGLIO, N.

Posadas

Simposio; 6to. Simposio Argentino de Procesos Biotecnológicos; 2021

Facultad de Ciencias Exactas, Químicas y Naturales. Universidad Nacional de Misiones

En el presente trabajo se propuso explotar el potencial de la etiqueta mGMOP para ser utilizada para la purificación de mGMOP-IFN a partir de sobrenadantes de cultivo de células CHO-K1 recombinantes mediante cromatografía de inmunoafinidad. Teniendo en cuenta que se ha demostrado un aumento de la afinidad de unión entre el epitope APARparatope CC1H7 en un entorno de alta fuerza iónica (Perotti y col., 2013), se llevó a cabo un diseño de experimentos con el fin de estudiar el efecto de diferentes sales a distintos pH mediante ELISA. De esta manera, se establecieron tres condiciones (KCl 3,75 M pH 7,5; NaCl 4,5 M pH 7,5; Na2SO4 1 M pH 8) observándose el máximo incremento de la afinidad aparente con respecto al control en ausencia de sal a pH 7. Las condiciones seleccionadas se evaluaron como estrategias de unión en el proceso de purificación cromatográfico. Para ello, se analizó la capacidad dinámica de la matriz Sepharose-CC1H7 mediante acondicionamiento de la siembra (sobrenadante conteniendo mGMOPIFN) con las diferentes sales al pH correspondiente, comparando los resultados con elmismo proceso realizado en ausencia de sal. La capacidad dinámica a C/C0=0,1 fue superior para la condición Na2SO4 1 M pH 8 con respecto a la siembra en ausencia de sal (3,2 veces), mientras que para el resto de las sales fue similar a esta última condición. No obstante, a relaciones C/C0>0,1 se observaron diferencias para todas las sales con respecto a la unión en ausencia de sal, indicando que la condición de alta fuerza iónica permite incrementar la masa de mGMOP-IFN a sembrar y resulta así, una estrategia eficaz para optimizar el proceso de purificación de proteínas de fusión al novedoso péptido.