CHO.K1 versus HEK-293 en la producción de variantes hiperglicosiladas de EPO humana como candidatos neuroterapéuticos

ITURRASPE, F.; BURGI, MM.; OGGERO EBERHARDT, M.

Santa Fe

Jornada; Encuentro de Jóvenes Investigadores de la UNL; 2021

Universidad Nacional del Litoral

Las enfermedades neurodegenerativas constituyen un conjunto de patologías que afectan el sistema nervioso central (SNC) y provocan desórdenes cognitivos, alteraciones de conductay cambios en la regulación del organismo. Estas se caracterizan por su cronicidad y evoluciónprogresiva. Actualmente, no existe un tratamiento efectivo para estas patologías y el mercado farmacéutico solo ofrece medicamentos destinados al tratamiento de su sintomatología. La EPO humana (hEPO) es una proteína encargada de la producción y mantenimiento de la masa de glóbulos rojos en sangre. Es considerada una droga segura y bien tolerada por el organismo para el tratamiento de la anemia. La hEPO es producida principalmente por los riñones. Estructuralmente consiste en una única cadena polipeptídica altamente glicosilada, portando tres sitios consenso de N-glicosilación y uno de O-glicosilación, responsables del 40% de su masa molecular, la que oscila entre 30-39 kDa (Lacombe & Mayeux, 1999). Además de su accionar hematopoyético, se ha demostrado que la hEPO participa en procesos de neuroprotección y neuroregeneración (Alnaeeli y col., 2012). Esta citoquina es producida en cerebro, principalmente por astrocitos, y en menor medida por neuronas, y a diferencia de la hEPO producida en riñón, exhibe una menor masa molecular aparente, debido a una menor complejidad en sus estructuras glicosídicas. Con el objetivo de potenciar su capacidad neuroprotectora, sin los efectos asociados a su actividade eritropoyética, en nuestro laboratorio se generaron variantes hiperglicosiladas de hEPO mediante glicoingeniería por hiperglicosilación. De este modo, se modificó la región molecular de la citoquina responsable de su actividad eritropoyética mediante la generación de nuevos sitios consenso de N-glicosilación. Esta estrategia permitió generar variantes que poseen nula actividad eritropoyética y conservar al mismo tiempo la actividad neuroprotectora, utilizando la línea celular CHO.K1 como plataforma de producción (Bürgi y col., 2021). Los resultados exitosos obtenidos a partir de la producción de las variantes de hEPO en células CHO.K1, despertaron el interés de su generación en células HEK-293, con el propósito de obtener moléculas con mayor grado de similitud a la citoquina producida en cerebro, dado que la glicosilación de proteínas en la línea celular HEK-293 se presenta con estructuras más simples: menor antenaricidad y contenido de ácido siálico. El objetivo general de este trabajo consiste en la generación de líneas celulares HEK-293 productoras de las variantes Mut 45_47, Mut 104 y Mut 151_153, cuyas propiedades fisicoquímicas y biológicas serán comparadas con respecto a las de sus análogas expresadas en células CHO.K1.