Optimización de un ELISA sándwich útil para la evaluaciónfarmacocinética de variantes hiperglicosiladas de eritropoyetina humana

WANDEL-PETERSEN, V.; OGGERO EBERHARDT, M.; BURGI, MM.

Santa Fe

Jornada; Encuentro de Jóvenes Investigadores de la UNL; 2021

Impulsados por la creciente búsqueda de moléculas útiles para el tratamiento de enfermedadesneurodegenerativas, nuestro grupo de trabajo innovó en la producción de entidades neuroprotectoras y neuroplásticas derivadas de eritropoyetina humana (hEPO) mediante tecnología de glicoingeniería por hiperglicosilación (Bürgi y col., 2021). Los análogos Mut 45_47 y Mut 151_153 de hEPO incorporaron sitios adicionales de N-glicosilación en aminoácidos críticos de la molécula, responsables de su actividad eritropoyética, permitiendo el bloqueo de la misma sin afectar suaccionar orientado a la neuroactividad. Dichas moléculas han sido previamente caracterizadas restando la evaluación de su comportamiento farmacocinético. Este aspecto es de gran relevancia para candidatos terapéuticos que deban administrarse en el tratamiento de patologías crónicas como son las enfermedades neurodegenerativas. De acuerdo con lo recomendado por la Farmacopea internacional, el análisis farmacocinético de hEPO recombinante (rhEPO) -inyectada en animales de experimentación- se realiza mediante la evaluación de su actividad eritropoyética in vitro. No obstante, dado que estas variantes de rhEPO fueron generadas con el objetivo de bloquear dicha actividad, no resulta posible su análisis farmacocinético empleando tal determinación. Frente a esta problemática, en el presente trabajo, se llevó a cabo la optimización de un ELISA sándwich (ES), previamente desarrollado en nuestro laboratorio, con el objetivo de obtener un ensayo con un adecuado límite de detección que permita llevar a cabo los estudios farmacocinéticos de las variantes hiperglicosiladas Mut 45_47 y Mut 151_153 en muestras complejas como lo es el plasma de ratas.