INVESTIGADORES
MIRANDA Leandro Andres
congresos y reuniones científicas
Título:
Vitelogenina en pejerrey (Odontesthes bonariensis): purificación, producción de anticuerpos y desarrollo de un test de ELISA.
Autor/es:
MARCELA FERRARO; DIEGO GÓMEZ-CASATTI; LEANDRO A. MIRANDA; GUSTAVO M. SOMOZA
Lugar:
Mar del Plata
Reunión:
Congreso; Congreso Conjunto de Sociedades Biomédicas.; 2004
Institución organizadora:
Congreso Conjunto de Sociedades Biomédicas.
Resumen:
La vitelogenina (Vtg) es una proteína producida por los peces hembra que es precursora de las proteínas de reserva del huevo. Su expresión se encuentra bajo el control del estradiol (E2) de origen ovárico. Por este motivo las perturbaciones en su expresión se utilizan como indicadores de disrupción endócrina producida por contaminantes estrogénicos o xenoestrógenos (tales como pesticidas, agroquímicos, desechos de origen industrial y urbano). El pejerrey es una especie de importancia económica (pesca deportiva y consumo) en la provincia de Bs.As. y ha demostrado ser altamente sensible a la contaminación ambiental. El objetivo de este trabajo es el desarrollo de un test de ELISA específico para vitelogenina de pejerrey con el objeto de utilizarla como biomonitor.
La vitelogenina de pejerrey fue purificada a partir de suero de pejerreyes macho inducidos con E2, por cromatografía de intercambio iónico (DEAE-sepharosa). La purificación fue monitoreada por geles de poliacrilamida y Western-blot utilizando un antisuero anti Vtg de lubina europea. La vitelogenina de pejerrey presenta una masa molecular aparente de 180 Kd en geles de poliacrilamida desnaturalizantes (SDS), correspondiendo a las dos subunidades homólogas que conforman la proteína completa. Una vez purificada, esta proteína fue utilizada para obtener anticuerpos policlonales en conejo. La especificidad del anticuerpo producido fue determinada por Western-blot y no presenta reactividad cruzada con proteínas presentes en sueros de ejemplares machos sin inducir con E2. Este anticuerpo anti-vitelogenina se usó como reactivo para desarrollar un test de ELISA específico para pejerrey. El límite de detección para el ensayo de ELISA resultó de 10 ng/ml de vitelogenina purificada.
