Potencial antioxidante de Baccharis incarum: aislamiento de metabolitos bioactivos.

ZAMPINI I,; VERA N,; BARDÓN A.,; ISLA M.I.

Córdoba

Congreso; I Reunión de Biotecnología aplicada a plantas medicinales y aromáticas; 2006

CEPROCOR, RED DE BIOTECNOLOGIA

Introducción El género Baccharis es el más rico en especies dentro de la tribu Asteraceae, estimándose su número entre 400 y 500. Su distribución geográfica es exclusivamente americana. En Argentina está representado por 96 especies. (Giuliano, 2001). La especie seleccionada para el presente estudio, Baccharis incarum, crece a más de 3800 metros sobre el nivel del mar (Antofagasta de la Sierra, Provincia de Catamarca, Puna de Atacama) en zonas extremas; de clima árido, baja presión atmosférica, con un gran rango de temperaturas y alta radiación solar. Popularmente se conoce como “lejía” y es muy utilizada por los pobladores como protector gástrico y hepático, para restaurar la circulación sanguínea, reducir procesos inflamatorios, curar úlceras, quemaduras y heridas de piel. También se utiliza como forraje en la actividad ganadera y como combustibles. El objetivo del presente trabajo fue evaluar el potencial antioxidante de partes aéreas de B. incarum y aislar y purificar el compuesto responsable de la actividad. Metodología: El material vegetal se recolectó en febrero de  2005 en Antofagasta de la Sierra, Catamarca, Argentina. Se prepararon tinturas en etanol 80 % y se determinó el contenido de compuestos fenólicos totales (Singleton et al 1999), flavonas, flavonoles, flavononas y dihidroflavononas (Popova et al 2005). Evaluación de actividad antioxidante: Se determinó la capacidad depuradora del radical libre DPPH (Yamaguchi et al 1998), radical catión ABTS (Re et al 1999), superóxido (Xantina/ xantina oxidasa/ azul de tetrazolium/ EDTA) (Kong et al 2000), hidroxilo (deoxiribosa/ FeCl3/ EDTA/ acido ascórbico/ H2O2) y peróxido de hidrógeno (Aruoma 1987). Se cuantificó el poder reductor (ferricianuro de potasio/ácido tricloroacético/FeCl3) (Yen et al 1993) y se comparó su actividad frente a antioxidantes sintéticos y naturales. Se analizó el perfil fitoquímico de la especie. Extracción y aislamiento de compuestos bioactivos: Material desecado de  B. incarum fue extraído sucesivamente con éter de petróleo, éter etílico y metanol. El extracto obtenido con éter etílico se evaporó a sequedad y se resuspendió en etanol, luego se sometió a una  cromatografía en Sílica gel  G60 la cual fue eluída con Cloroformo – Metanol  en relación de polaridad creciente. Las fracciones recolectadas se analizaron por TLC (solvente de corrida: Cloroformo: Acetato de etilo 10%) y mediante ensayos autográficos se evaluó la capacidad antioxidante total. Las fracciones activas fueron sometidas a un proceso de purificación por HPLC. La identificación de los metabolitos bioactivos se realizó mediante espectros UV-visibles y cromatografías en capa fina. La dilucidación estructural se realizará mediante espectroscopía de Resonancia Magnética Nuclear (H1-RMN) Resultados y Discusión: El extracto etanólico de Baccharis incarum  presentó un elevado contenido de flavonoides, principalmente flavonas. Mostró capacidad de donar electrones en presencia del radical libre DPPH (Valores de IC50  de 25 µg/mL)  y valores TEAC de 7.833 /100 g de peso seco. En el sistema no enzimático de generación de O2-, el extracto resultó ser depurador de radicales superóxido. Además fue efectivo depurador de radicales hidroxilos y de H2O2.  Se realizó el aislamiento bioguiado de metabolitos con capacidad antioxidante mediante sucesivas extracciones con diferentes solventes, cromatografía en columna preparativa y cromatografía de alta resolución obteniendo dos compuestos mayoritarios activos C1 y C2. (Fig. 1). Los compuestos bioactivos de Baccharis corresponderían de acuerdo a análisis espectrales y cromatografías en capa fina reveladas con distintos sistemas químicos a flavonas metoxiladas. Fig. 1- Aislamiento bioguiado de metabolitos con actividad antioxidante: Autografía utilizando el ABTS.+ inmovilizado en gel.                                                      C1           C2 Conclusiones Previamente demostramos que los extractos etanólicos de Baccharis incarum presentan una elevada capacidad antimicrobiana, esto junto a la capacidad antioxidante y depuradora de especies reactivas de oxigeno demostrada en este trabajo indicarían las potenciales aplicaciones en la industria farmacéutica y alimenticia. Por otro lado, si bien aislamos dos de los metabolitos responsables de la actividad antiradicalaria, son necesarios posteriores estudios para confirmar la identidad estructural de los mismos. Bibliografía. Singleton et al. (1999) Methods Enzymol. 299: 152-178. Popova et al (2005). Phytomedicine 12: 221-228.                                                        Yamaguchi et al.  (1998). Biosci. Biotechnol. Biochem. 62: 1201-1204.                            Re et al. (1999).Free Radic. Biol. Med. 26: 1231-1237. Kong et al. (2000) J. Etnopharmacol. 73: 199-207. Aruoma et al. (1987). J. Inorg. Biochem. 29: 289-299. Yen & Chen (1995). J.  Agric. Food Chem. 43: 27-32.