Búsqueda de productos naturales con capacidad inhibitoria de enzimas proinflamatorias en Parastrephia lucida

D´ÁLMEIDA R, VILDOZA E, ISLA MI

SM de Tucuman

Jornada; X Jornadas de Comunicaciones Científicas de la Facultad de Ciencias Naturales e Instituto Miguel Lillo; 2011

Facultad de Ciencias Naturales e IML

Los antiinflamatorios a pesar de sus conocidos efectos secundarios, continúan siendo el grupo terapéutico más utilizado en el mundo en el tratamiento de procesos fisiopatológicos. Su mecanismo de acción está relacionado con la inhibición de enzimas que forman parte del metabolismo del ácido araquidónico. Este ácido se encuentra esterificado en los fosfolípidos de membrana y cuando por cualquier mecanismo las células son dañadas, es liberado al citoplasma por la acción de fosfolipasas celulares, como la A2. Una vez liberado puede seguir dos vías metabólicas, llevadas a cabo por dos enzimas claves: la ciclooxigenasa, que determina la producción de prostaglandinas y tromboxanos y la lipoxigenasa que conduce a la formación de leucotrienos e hidroperóxidos. Éstos juegan un rol muy importante en las enfermedades inflamatorias y alérgicas, mediando el dolor, la fiebre y el edema. Por otro lado, los mucopolisacáridos, como el ácido hialurónico, que ejercen un papel protector y de unión del tejido conectivo de las articulaciones, son hidrolizados por la enzima hialuronidasa en procesos inflamatorios crónicos como la artritis reumatoidea. Actualmente se ha despertado un gran interés en la búsqueda de productos naturales con actividad antiinflamatoria con mínimos o escasos efectos adversos. Parastrephia lucida es una especie vegetal presente en la Puna argentina muy utilizada en medicina tradicional para la fiebre, dolores reumáticos e inflamaciones. Por ello, el objetivo de este trabajo es evaluar la capacidad inhibitoria de P. lucida sobre diferentes enzimas que intervienen en el proceso inflamatorio: fosfolipasa A2, lipoxigenasa y hialuronidasa. Se realizó una maceración durante siete días en metanol de partes aéreas trituradas de P. lucida obteniendo un extracto total (ET) que fue sometido a una partición líquido-líquido con diclorometano y agua dando dos subextractos: diclorometánico (DCM) y acuoso (AC). Se fraccionó el subextracto DCM por cromatografía en columna usando Sephadex LH-20 obteniéndose siete fracciones (A-G) Se evaluó el perfil fitoquímico del ET/subextractos y fracciones en las placas de sílica gel usando como reveladores físicos (UV 254 y 365 nm) y químicos (NP para compuestos fenólicos, Dragendorff para alcaloides, KOH/UV para cumarinas y anisaldehído/H2SO4 para saponinas y terpenos). La capacidad de los extractos/subextractos/fracciones de inhibir la actividad de las enzimas lipooxigenasa, fosfolipasa y hialuronidasa se determinó espectrofotométricamente cuantificando los productos de la reacción a 234 nm, 415 nm a 585 nm. Los resultados obtenidos mostraron que si bien todas las muestras estudiadas presentaron efecto inhibitorio sobre las tres enzimas por lo general fueron más efectivos sobre una de ellas. El ET, subextractos DCM y AC, resultaron más efectivos para inhibir a las enzimas lipoxigenasa y fosfolipasa que a la enzima hialuronidasa. El subextracto DCM presentó mayor actividad anti-lipoxigenasa y anti-fosfolipasa que el subextracto AC, por ello se lo seleccionó para continuar con el aislamiento bioguiado de compuestos con actividad antiinflamatoria. Las fracciones (ricas en compuestos fenólicos) demostraron mayor potencia antiinflamatoria que los extractos y subextractos. La fracción C (rica en ácidos fenólicos y cumarinas) presentó mayor actividad anti-lipoxigenasa mientras que la fracciones D a G (ricas en compuestos de naturaleza flavonoide) presentaron mayor actividad anti-fosfolipasa. Cuando se estudió el mecanismo de inhibición de la fracción C sobre la actividad de la enzima lipoxigenasa se demostró que produce una inhibición clásica de tipo no competitiva, con una constante de inhibición de 60 µg PS/ml. Además, se encontró un sinergismo de adición entre el naproxeno (antiinflamatorio comercial) y la fracción C. De acuerdo a los resultados expuestos se refuerza el interés en el estudio de P. lucida, como fuente de compuestos naturales con actividad antiinflamatoria y justifica continuar el proceso de aislamiento y purificación de los compuestos bioactivos, así como el estudio del mecanismo de acción de dichos compuestos.