Mecanismo de funcionamiento de una ATPasa transportadora de Cu+ de Legionella pneumophila: Cu+ y ATP en el ciclo de reacción

MA. PLACENTI; EA. ROMAN; FL. GONZÁLEZ FLECHA; RM GONZALEZ LEBRERO

Montevideo

Congreso; 4th Protein Biophysics at the end of the world; 2019

Institut Pasteur de Montevideo

Las P-ATPasas constituyen una gran familia de proteínas que acoplan la energía química procedente de la hidrólisis del ATP al transporte de solutos a través de membranas biológicas. Dentro de esta familia, las P1B-ATPasas se encargan del transporte de iones de metales de transición, jugando un rol fundamental en la regulación de su concentración intracelular. Las ATPasas transportadoras de cobre son las más conservadas y ampliamente distribuidas de esta subfamilia, presentes tanto en bacterias como en humanos, donde mutaciones de estasproteínas constituyen la causa de las enfermedades de Menkes yWilson. Si bien las ATPasas transportadoras de cobre comparten elementos estructurales y funcionales con otras P-ATPasas, diversos autores plantean diferencias en su mecanismo de funcionamiento respecto de aquel descripto para los miembros más conocidos de la familia. Es por ello que el objetivo general de mi trabajo de tesis consiste en caracterizar las propiedades cinéticas y termodinámicas de la ATPasa transportadora de Cu⁺ proveniente de Legionella pneumophila (CopA) para establecer tal mecanismo. Cabe destacar que, más allá de dominios aislados, LpCopA es la única dentro de este grupo de proteínas que cuenta con su estructura cristalográfica resuelta. Para alcanzar el objetivo planteado se realizaron determinaciones de actividad ATPasa en condiciones de estado estacionario de LpCopA en presencia de distintas concentraciones de sus ligandos naturales Cu⁺ y ATP. A partir de la caracterización de los efectos observados, se desarrolló un primer modelo cinético para explicar el rol de dichos ligandos dentro de su ciclo de reacción.