INVESTIGADORES
GONZALEZ LEBRERO Rodolfo Martin
congresos y reuniones científicas
Título:
Caracterización de la transición entre las rutas directa y fisiológica de oclusión de K+ en la Na+/K+-ATPasa provocada por el aumento de la concentración de Na+
Autor/es:
JOSÉ LUIS E. MONTI; PABLO G. SCHVARTZ; RODOLFO M. GONZÁLEZ-LEBRERO; SERGIO B. KAUFMAN; PATRICIO J. GARRAHAN; ROLANDO C. ROSSI
Lugar:
Villa Carlos Paz, Córdoba, Argentina.
Reunión:
Congreso; XXXIV reunión anual de la Sociedad Argentina de Biofísica (SAB).; 2005
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Biofísica
Resumen:
Introducción La Na+/K+-ATPasa es una proteína integral de membrana que acopla la hidrólisis de una molécula de ATP (en ADP y Pi) al intercambio de 3 Na+ del citoplasma por 2 K+ del medio extracelular. El mecanismo catalítico no se conoce claramente. Se ha demostrado que la enzima se fosforila durante el ciclo de reacción y que el K+ no es esencial para la actividad ATPásica ya que puede ser reemplazado por otros cationes como el Rb+ e incluso el mismo Na+. También se sabe que existen intermediarios de transporte en los que el K+ se halla ocluído (atrapado en la enzima). Dichos intermediarios pueden obtenerse a partir de la ruta directa, esto es sin la formación de la fosfoenzima, o bien por la ruta fisiológica, a través de la defosforilación activada por K+ de la fosfoenzima. Dado que el Na+ activa la fosforilación por ATP de la enzima, es posible caracterizar la transición entre dichas rutas de oclusión mediante el agregado de concentraciones crecientes de Na+. Con este fin, se realizaron medidas de intermediarios ocluídos con Rb+ a 25ºC utilizando una preparación purificada de la Na+/K+-ATPasa de riñón de cerdo, en medios conteniendo 2.5mM ATP, 0.5mM de Mg2+ libre, imidazol-HCl 25mM, pH=7.4, y diferentes concentraciones de [86Rb+]RbCl, NaCl, y ColinaCl para mantener constante la fuerza iónica (la concentración total de las últimas tres sales se mantuvo siempre en 170mM). La reacción se frenó a los 6-10 segundos de iniciada. Paralelamente se realizaron determinaciones de actividad ATPásica con el fin de evaluar el funcionamiento global de la enzima. Resultados              Resultados como el mostrado revelan la transición entre tres modos de funcionamiento de la enzima a medida que aumenta la [Na+]: 0-ATPasa, Na+/K+-ATPasa, y Na+/Na+-ATPasa. Conclusión Los resultados pueden ser explicados tanto por un mecanismo de tipo ping-pong en el que Na+ y Rb+ compiten por los mismos sitios de unión pero son transportados alternadamente durante el ciclo, como también por un mecanismo secuencial ordenado en el que se forma un intermediario con 3 Na+ y 2 K+ unidos/ocluídos simultáneamente, y donde la unión de unos y otros se da sobre intermediarios separados por al menos un paso irreversible. Subsidiado por: CONICET, ANPCYT, y UBA.