Estabilidad térmica de la Na+/K+ ATPasa.

SB. KAUFMAN; FL. GONZÁLEZ FLECHA; RM. GONZÁLEZ-LEBRERO

Bernal, Buenos Aires

Taller; Taller de la Sociedad Argentina de Biofísica. "Biofisica de macromoléculas: aspectos estructurales e implicancias biológicas y biotecnológicas"; 2007

Sociedad Argentina de Biofísica

El conocimiento de la dinámica del plegamiento y la estabilidad de una proteína es de suma importancia para comprender sus funciones biológicas. Ello explica la abundancia de trabajos publicados interesados en estos estudios y aplicados a una gran diversidad de proteínas. Sin embargo, es escasa la información disponible sobre proteínas de membrana.La Na+/K+-ATPasa (NKA) es una proteína integral de membrana constituida por dos sub-unidades: una alfa, formada por cuatro dominios estructurales (uno transmembránico y tres intracelulares), y una beta. Transporta activamente entre la célula y el medio externo tres Na+ y dos K+ por cada molécula de ATP hidrolizada. Durante su ciclo de trabajo alterna entre dos estados conformacionales denominados E1 y E2, y se generan los denominados "estados ocluidos", en los cuales los iones transportados se encuentran atrapados en el interior de la proteína.En el presente trabajo se estudió la estabilidad térmica de la Na+/K+-ATPasa empleando como criterio de integridad las medidas de Actividad ATPasa y la cantidad de Rb+ ocluido (Rbocl).Adicionalmente estudiamos la estabilidad de la NKA en la conformación E1, en medios de preincubación con o sin Na+, y en la conformación E2, en presencia de Rb+. Se observó que en todos los medios de preincubación utilizados tanto la actividad ATPasa como la cantidad de Rbocl disminuyen exponencialmente con el tiempo de preincubación. Sin embargo, la actividad ATPasa disminuye más lentamente que la medida de Rbocl, cuando la preincubación se llevó a cabo a la misma temperatura y medio de preincubación.Los coeficientes de velocidad de inactivación (k), obtenidos a partir de medidas de actividad ATPasa aumentan drásticamente cuando la temperatura es superior a 51ºC (en ausencia o presencia de Na+). Sin embargo, en presencia de Rb+ este aumento se verifica a partir de los 54ºC. Los resultados fueron analizados en términos de la ecuación de Arrhenius. Los valores de la energía de activación del proceso de inactivación indican que la presencia de Rb+ en el medio de preincubación estabiliza la proteína frente a la inactivación térmica.Con subsidios de CONICET y ANPCyT.